鎘誘導(dǎo)下活性氧自由基、細(xì)胞內(nèi)鈣離子和細(xì)胞凋亡三者間的關(guān)系.pdf

1、本文通過(guò)正常細(xì)胞(HL-7702)和腫瘤細(xì)胞(Raji)的體外實(shí)驗(yàn)，研究鎘誘導(dǎo)下活性氧自由基(ROS)堆積，細(xì)胞內(nèi)鈣離子變化和細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系。細(xì)胞凋亡水平通過(guò)Hoechst33258染色實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)。細(xì)胞內(nèi)鈣離子變化和細(xì)胞內(nèi)活性氧自由基堆積分別采用熒光染料Flu-3/AM和DCFH-DA染色后通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光強(qiáng)度來(lái)獲得。 在實(shí)驗(yàn)中我們加入了可以專一螯合細(xì)胞外鈣離子的EGTA(20mM)和能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)螫合細(xì)胞內(nèi)鈣離子的B

2、APTA-AM(10μM)處理細(xì)胞，以研究在鎘離子誘導(dǎo)下細(xì)胞內(nèi)濃度明顯上升的鈣離子主要來(lái)源細(xì)胞內(nèi)還是細(xì)胞外；通過(guò)加入BAPTA-AM(10gM)和可以清除細(xì)胞內(nèi)ROS的NAC(15mM)后檢測(cè)細(xì)胞凋亡率變化，以進(jìn)一步研究細(xì)胞內(nèi)鈣離子和ROS堆積在細(xì)胞凋亡途徑中的作用。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)HL-7702和Raji細(xì)胞在用鎘處理以后細(xì)胞凋亡率會(huì)明顯上升，在提高了細(xì)胞凋亡水平的同時(shí)，細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度和ROS堆積也明顯增加。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)鈣離子

3、和ROS被清除以后，細(xì)胞凋亡率也顯著下降。BAMTA/AM可以降低了由鎘誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞鈣離子升高(P<0.001)，ROS積累增加(P<0.001)和細(xì)胞凋亡水平升高(P<0.001)等效應(yīng)。EGTA可以降低了由鎘離子誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞內(nèi)鈣離子升高(P<0.01)，ROS積累增加(P<0.001)但是不能降低細(xì)胞凋亡水平。以上結(jié)果證明了由鎘誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)鈣離子上升的鈣離子主要來(lái)源細(xì)胞內(nèi)(HL-7702細(xì)胞中約占78％，Raji細(xì)胞中約占59％

4、)，另外少部分來(lái)源細(xì)胞外。實(shí)驗(yàn)結(jié)果同時(shí)顯示，在鎘離子的誘導(dǎo)下細(xì)胞凋亡和ROS堆積(HL-7702細(xì)胞中r=0.8781；Raji細(xì)胞中r=0.6919)和細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度上升(HL-7702細(xì)胞中r=0.9073；Raji細(xì)胞中r=0.8692)均呈顯著正相關(guān)。而ROS堆積和細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度上升也呈顯著jF相關(guān)(HI-7702細(xì)胞中r=0.8619；Raji細(xì)胞中r=0.9061)。 通過(guò)本實(shí)驗(yàn)我們可以得出兩個(gè)結(jié)論：1)在鎘離