水稻黑條矮縮病毒S5基因組功能的研究.pdf

1、應(yīng)用RT-PCR技術(shù)擴增得到水稻黑條矮縮病毒(Rice black-streaked dwarfvirus,RBSDV)浙江水稻分離物(Zj)基因組片段5(S5)的全長cDNA克隆并測定了它的全序列。RBSDV-Zj S5由3164個堿基組成，具有末端保守序列(+)5′-AAGTTTTTTTCACTC---GAGTGAATACAGCTAATGTC-3′，緊鄰其末端保守序列，有一段特異性7個堿基的反向重復(fù)序列。S5編碼鏈含有二個開放閱讀框

2、(openreading fram，ORF)，分別編碼 107.1kDa和26.5kDa的p5A和p5B蛋白。序列同源性比較發(fā)現(xiàn)，RBSDV-Zj S5 與 RBSDV 河北玉米分離物(RBSDV-Hbm)S5、Fijidisease virus(FDV) S5、Mal de Rio Cuarto virus(MRCV)S5的同源性分別為93.58％、49％和65.60％。 構(gòu)建了S5的原核表達(dá)載體。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，在大腸桿菌中

3、表達(dá)了RBSDV-S5編碼的p5A和p5B 2種蛋白，并制備了相應(yīng)的抗血清。Western-blot分析結(jié)果顯示，用p5A的抗血清能夠與RBSDV侵染的水稻葉片和純化的RBSDV粒子蛋白發(fā)生反應(yīng)；p5B的抗血清只能與RBSDV侵染的水稻葉片蛋白發(fā)生反應(yīng)。表明RBSDV-Zj p5A是一種結(jié)構(gòu)蛋白，而p5B是一種非結(jié)構(gòu)蛋白。 構(gòu)建了S5第二個編碼框的植物表達(dá)載體pRR-S5BC，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入水稻品種秀水04中，經(jīng)PCR、S