小鼠胚胎OPS管內(nèi)解凍和直接移植技術(shù)及冷凍胚胎MMPs基因表達(dá)的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)以小鼠為模式動(dòng)物，研究了不同溫度條件下囊胚的冷凍保存，OPS管內(nèi)解凍和直接移植，體外受精各發(fā)育階段胚胎的玻璃化冷凍以及解凍后胚胎MMP-2和MMP-9基因轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)情況，為家畜胚胎的玻璃化冷凍和直接移植提供技術(shù)參數(shù)，并試圖從分子水平探討冷凍胚胎妊娠率低和產(chǎn)仔率低的可能原因。 實(shí)驗(yàn)一進(jìn)行了冷凍液篩選，結(jié)果表明，25℃室溫和37℃恒溫臺(tái)條件下，選擇OPS為胚胎承載物，用EDFS30兩步法或者用EFS40一步法均能成功保存小

2、鼠囊胚，25℃室溫不使用恒溫臺(tái)條件下，EDFS40一步法或EFS40兩步法均能達(dá)到理想的冷凍效果；試驗(yàn)二驗(yàn)證了胚胎管內(nèi)解凍和直接移植方法的可行性，結(jié)果顯示，OPS細(xì)段總長(zhǎng)度為2.5cm，EDFS30冷凍液吸入長(zhǎng)度小于1cm時(shí)，管內(nèi)解凍與管外解凍后胚胎發(fā)育率相比無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，將OPS從裝有蔗糖溶液的離心管中移入含有PBS的離心管中浸12min，胚胎的體外發(fā)育率不受影響，并且將管內(nèi)解凍的胚胎用OPS做導(dǎo)管直接移植給假孕受體，

3、胚胎移植受體妊娠率(91.67％)，妊娠產(chǎn)仔率(42.42％)與新鮮胚胎(90.9％和40％)和管外解凍胚胎(84.61％和46.91％)差異不顯著(P＞0.05)，該方法應(yīng)用于小鼠桑椹胚和孵化囊胚后，各自體外發(fā)育率與管外解凍組均無(wú)顯著差異(P＞0.05)；實(shí)驗(yàn)三系統(tǒng)研究了體外各發(fā)育階段胚胎的冷凍保存，結(jié)果表明，原核胚解凍后囊胚率和孵化囊胚率低于其它各個(gè)發(fā)育階段的胚胎，并且與對(duì)照組有顯著差異(P＜0.05)。2-細(xì)胞，4-細(xì)胞，8-細(xì)胞

4、，桑椹胚冷凍保存后其囊胚率和孵化囊胚率在不同發(fā)育階段無(wú)顯著差異(P＞0.05)。體內(nèi)發(fā)育實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，冷凍2-細(xì)胞胚胎妊娠產(chǎn)仔率達(dá)57.14％，與新鮮胚胎移植組無(wú)顯著差異(61.61％，P＞0.05)。冷凍原核胚移植后獲得較低的妊娠率和產(chǎn)仔率，與對(duì)照差異顯著(P＜0.05)。冷凍8-細(xì)胞和4-細(xì)胞胚胎移植后的妊娠率，產(chǎn)仔率都低于其它發(fā)育階段的胚胎，但與新鮮對(duì)照組差異不顯著(P＞0.05)。囊胚細(xì)胞記數(shù)表明，除原核胚外，其余發(fā)育階段胚胎都有很