H3N2亞型豬流感病毒分離鑒定及血凝素基因分子進(jìn)化分析.pdf

1、豬流感(SI)是由豬流感病毒(SIV)引起的豬的一種急性、高度接觸性呼吸道傳染病。單純感染SI時(shí)死亡率低，繼發(fā)或混合感染其它病原體時(shí)，死亡率顯著升高，給養(yǎng)豬業(yè)造成很大的經(jīng)濟(jì)損失，而且由于豬是禽和哺乳動(dòng)物流感病毒的中間宿主和產(chǎn)生重組毒株的混合器，具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義，因此對(duì)SIV的研究已成為流感研究中的熱點(diǎn)。 本研究從河北省某屠宰場(chǎng)隨機(jī)采集豬鼻棉拭子，通過(guò)SPF雞胚尿囊腔接種進(jìn)行病毒分離，對(duì)分離獲得的病毒進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、血清學(xué)

2、鑒定。結(jié)果透射電鏡負(fù)染觀察到典型的球狀病毒粒子，直徑為80nm左右；利用禽流感H5、H7、H9和豬流感H1、H3亞型特異性血清鑒定，確定分離株為H3N2亞型SIV，命名為A/Swine/Hebei/1/2005(H3N2)，A/Swine/Hebei/24/2005(H3N2)，A/Swine/Hebei/68/2005(H3N2)，為SI的防制與監(jiān)測(cè)打下前期工作基礎(chǔ)。 本實(shí)驗(yàn)測(cè)定了A/Swine/Hebei/1/2005(H3

3、N2)的理化特性及對(duì)SPF雞和清潔級(jí)昆明鼠的致病性。該毒株對(duì)乙醚、氯仿、酸(pH3.0)敏感，血凝素為熱穩(wěn)定型。雞胚半數(shù)感染量(EID50)、腦內(nèi)接種致病指數(shù)(ICPI)和靜脈接種致病指數(shù)(IVPI)這三個(gè)致病性指標(biāo)測(cè)定結(jié)果分別為10-8.77/0.2ml，1.16/0.05ml，0.71/0.1ml，SPF雞致病性試驗(yàn)結(jié)果為10天內(nèi)死亡2只，結(jié)合禽流感致病性判斷標(biāo)準(zhǔn)，判定該分離株對(duì)SPF雞為低致病性。試驗(yàn)組SPF雞眼觀可見(jiàn)肺臟病變部呈

4、暗紅色；肝臟有少量出血點(diǎn)；腎臟呈“花斑腎”；肌胃和腺胃交界處有點(diǎn)狀出血，鏡下可見(jiàn)肺淤血、呼吸毛細(xì)管腔變小、間質(zhì)水腫；腎臟淤血、腎小管上皮細(xì)胞變性、壞死；肝臟有紅細(xì)胞聚集成團(tuán)。A/Swine/Hebei/1/2005(H3N2)對(duì)清潔級(jí)昆明鼠為低致病性，試驗(yàn)組昆明鼠眼觀只見(jiàn)肺部病變，鏡下可見(jiàn)肺血管明顯淤血，間質(zhì)中有紅細(xì)胞浸潤(rùn)；腎小管上皮細(xì)胞變性、壞死。昆明鼠的同居感染試驗(yàn)證明A/Swine/Hebei/1/2005(H3N2)可在昆明鼠間

5、傳播，為SIV在小鼠間傳播的深入研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 從接種A/Swine/Hebei/1/2005(H3N2)的SPF雞胚尿囊液中提取病毒總RNA，設(shè)計(jì)血凝素(HA)基因特異性引物，RT-PCR擴(kuò)增并測(cè)序。分析A/Swine/Hebei/1/2005(H3N2)HA1基因與從Genbank上選取的31株參考毒株HA1基因間的同源性，結(jié)果表明A/Swine/Hebei/1/2005(H3N2)與A/Swine/Guangdong/