東亞三角渦蟲Dj-inx-like基因的表達(dá)及進(jìn)化研究.pdf

1、東亞三角渦蟲（Dujesiajaponica）是扁形動(dòng)物門的代表動(dòng)物，也是首次出現(xiàn)三胚層的兩側(cè)對(duì)稱的生物。同時(shí)，渦蟲具有極強(qiáng)的再生能力，成為我們研究物種起源、進(jìn)化、再生、胚胎發(fā)育的模式生物。Innexin基因家族是在無脊椎動(dòng)物中間隙連接蛋白的存在形式，它除了行使基本的間隙連接功能之外，在胚胎發(fā)育、腫瘤發(fā)生、染色體遺傳病等方面的作用被依次發(fā)掘出來。本論文利用生物信息學(xué)方法研究渦蟲DjInx-like基因在生物學(xué)進(jìn)化上的地位，利用North

2、ern雜交、整體原位雜交等分子生物學(xué)手段來研究渦蟲不同時(shí)期DjInx-like基因的表達(dá)情況，以期了解渦蟲DjInx-like基因在胚胎發(fā)育、渦蟲成蟲和再生過程中的功能，從而使我們從分子水平上進(jìn)一步了解再生機(jī)理和調(diào)控機(jī)制。我們構(gòu)建了L4440-DjInx-like干擾載體，以推測(cè)DjInx-like基因在渦蟲不同時(shí)期可能承擔(dān)的生物學(xué)功能。
　　從東亞三角渦蟲文庫中挑選出克隆B929，經(jīng)BLASTP確定隸屬于Innexin基因家族，

3、具有INX蛋白的保守結(jié)構(gòu)域命名為DjInx-like基因。該基因cDNA由501bp組成最大開放閱讀框（ORF），編碼166個(gè)氨基酸。利用該基因編碼的蛋白進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)生樹分析，表明東亞三角渦蟲DjInx-like位于無脊椎動(dòng)物Innexin基因家族分枝的基部，脊椎動(dòng)物Pannexin基因家族和無脊椎動(dòng)物Innexin基因家族各自聚類，進(jìn)一步證明DjInx-like基因與Innexin基因家族的一致性，認(rèn)為DjInx-like基因是一種新型

4、的Inx基因。
　　利用整體原位雜交等技術(shù)研究該基因在渦蟲體內(nèi)的表達(dá)情況。胚胎原位雜交信號(hào)位于中胚層，并隨著中胚層的分化轉(zhuǎn)移到實(shí)質(zhì)組織中；成體渦蟲表達(dá)在實(shí)質(zhì)組織上，與胚胎原位雜交結(jié)果有連貫性；再生渦蟲的整體原位雜交信號(hào)在實(shí)質(zhì)組織上，與完整的成體渦蟲表達(dá)有一致性；被干擾的渦蟲的再生及非再生階段的原位雜交結(jié)果也呈現(xiàn)出與完整的成體渦蟲表達(dá)有一致性。RNAi實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，DjInx-like基因在渦蟲再生過程中發(fā)揮一定作用，導(dǎo)致渦蟲眼點(diǎn)發(fā)