鞘氨醇單胞菌的篩選鑒定及其胞外多糖的研究.pdf

1、微生物胞外多糖廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、石油、日用輕工等多個領(lǐng)域，越來越引起人們的關(guān)注。目前，世界上微生物多糖產(chǎn)量增長率約為10%，一些新型多糖的年增長率可達(dá)30%以上，其中細(xì)菌多糖占有很大的份額。本文從采集的樣品中篩選出胞外多糖產(chǎn)量較高的菌株W4-3，對其進(jìn)行研究，主要內(nèi)容有菌株的篩選鑒定、發(fā)酵產(chǎn)糖培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件的優(yōu)化、多糖的提取純化及其理化性質(zhì)的研究，主要結(jié)果如下：
　　 從采集到的樣品中分離篩選可產(chǎn)胞外多糖的細(xì)菌，經(jīng)過平

2、板鑒別初篩共篩選出可產(chǎn)胞外多糖的菌株15株，經(jīng)過搖瓶發(fā)酵復(fù)篩篩選出多糖產(chǎn)量明顯高于其他菌株的W4-3菌株。經(jīng)過對W4-3菌株的初步鑒定及16SrDNA序列的測定，鑒定該菌株為鞘氨醇單胞菌，將其16SrDNA序列進(jìn)行同源性比對構(gòu)建了其16SrDNA系統(tǒng)發(fā)育樹。
　　 用細(xì)菌W4-3進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)糖，在搖瓶條件下首先通過單因素實(shí)驗(yàn)研究培養(yǎng)基中碳源、碳源濃度、氮源、碳氮比和無機(jī)鹽離子(KH2PO4和MgSO4)這些基本組成成份對其產(chǎn)糖影響

3、并進(jìn)行分析，在此基礎(chǔ)上通過響應(yīng)面法確定其發(fā)酵產(chǎn)糖的最佳培養(yǎng)基基本組成成分：最佳碳源為蔗糖，濃度為40 g/L，最佳氮源為酵母膏，最佳碳氮質(zhì)量比為10，最佳KH2PO4濃度為1.0 g/L、Mg SO4濃度為0.80 g/L，以此條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，多糖產(chǎn)量可達(dá)7.158 g/L，與理論預(yù)測值7.235 g/L接近，回歸分析和驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明了該響應(yīng)面法的合理和可行性。之后通過單因素實(shí)驗(yàn)確定W4-3細(xì)菌發(fā)酵產(chǎn)糖其他工藝條件，最佳裝液量為30 mL/

4、250 mL，最佳初始發(fā)酵液pH為7。
　　 發(fā)酵產(chǎn)糖結(jié)束后的發(fā)酵液經(jīng)除菌、醇沉、Sevage法脫蛋白、透析濃縮后，冷凍干燥得多糖粉末。通過單因素和正交實(shí)驗(yàn)確定乙醇提取多糖的最佳工藝條件為：乙醇終濃度75%，提取溫度為4℃，提取時間為20 h。對多糖溶液進(jìn)行紫外光譜掃描，結(jié)果表明該多糖不含蛋白質(zhì)和核酸。對多糖進(jìn)行DEAE-52柱層析分離，結(jié)果表明該多糖樣品中基本不含中性多糖，主要由鹽洗脫下的酸性多糖組成。通過對多糖的紅外光譜圖分

5、析可知該細(xì)菌所產(chǎn)多糖在3500-3000cm-1、3000-2800 cm-1、1400-1200 cm-1、1000-1100 cm-1處均有多糖的典型特征吸收峰，多糖為β-D-葡萄吡喃糖苷鍵型，不含甘露糖。
　　 精制多糖粉末為乳白色，不溶于丙酮、95%乙醇和無水乙醚，較難溶于室溫下的蒸餾水中，較易溶解于沸蒸餾水及1M HCl中，很容易溶解于1M NaOH中。該多糖具有多糖類的基本顏色反應(yīng)，是非淀粉多糖，含有糖醛酸。對多糖粘