中國(guó)鹵蟲CIC基因在早期胚胎發(fā)育及鹽脅迫過(guò)程中的表達(dá)模式.pdf

1、鹵蟲(Artemia sinica)廣泛分布在沿海鹽田及內(nèi)陸高鹽水體中，鹵蟲的生活環(huán)境經(jīng)常是隨季節(jié)性鹽度變化而變化的。因此，適應(yīng)高滲和低滲環(huán)境在鹵蟲生理學(xué)方面則顯得十分的重要。中國(guó)鹵蟲的氯離子通道蛋白基因(As-ClC)，是氯離子通道蛋白家族的一個(gè)成員，當(dāng)細(xì)胞處于高滲或者低滲環(huán)境時(shí)，細(xì)胞通過(guò)激活鉀離子通道和氯離子通道來(lái)介導(dǎo)離子的內(nèi)流或者外流從而導(dǎo)致水的流動(dòng)來(lái)調(diào)劑細(xì)胞的體積使其維持細(xì)胞內(nèi)外離子的平衡。另外在ClC滲透調(diào)節(jié)通路中GCK-3/

2、ste20(ste20)基因也發(fā)揮著必不可或缺的作用，GCK-3/Ste20是一個(gè)絲氨酸/蘇氨酸激酶超級(jí)家族成員之一，在酵母菌中，細(xì)胞分裂、生長(zhǎng)、周期的調(diào)控以及在不同滲透脅迫下維持細(xì)胞內(nèi)外離子的動(dòng)態(tài)平衡都是通過(guò)激活Ste20從而引發(fā)一個(gè)MAPK的級(jí)聯(lián)反應(yīng)完成的。
　　 本文以中國(guó)鹵蟲為實(shí)驗(yàn)材料，首次采用分子克隆技術(shù)(RACE)成功克隆并得到ClC基因2201bp的全長(zhǎng)序列。被預(yù)測(cè)為跨膜11次，在C末端具有β胱硫醚合酶結(jié)構(gòu)域和電壓

3、門控ClC結(jié)構(gòu)域。
　　 利用原位雜交技術(shù)對(duì)ClC在鹵蟲胚胎發(fā)育不同時(shí)期的表達(dá)部位進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示As-ClC的表達(dá)位置廣泛且平均，整個(gè)蟲體均有分布，呈組成性表達(dá)。
　　 通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)ClC在鹵蟲胚胎發(fā)育不同時(shí)期及對(duì)As-ClC和GCK-3/ste20基因在鹽度脅迫實(shí)驗(yàn)中的表達(dá)量進(jìn)行研究，結(jié)果表明As-ClC在胚胎發(fā)育各時(shí)期均有表達(dá)，在進(jìn)入下一個(gè)生長(zhǎng)期以及生存環(huán)境發(fā)生變化時(shí)即15h和40h呈現(xiàn)出很高的

4、表達(dá)水平，進(jìn)入成蟲期后表達(dá)量仍然維持在一個(gè)很高的水平。在不同鹽度脅迫過(guò)程中，As-ClC和GCK-3/ste20基因總體上呈下調(diào)趨勢(shì)。ClC隨著鹽度的增加呈上升趨勢(shì)，除了鹽度為200‰其余實(shí)驗(yàn)組的表達(dá)量明顯低于對(duì)照組(28‰)而GCK-3/ste20則隨著鹽度的增加表達(dá)量呈下降的趨勢(shì)。隨著發(fā)育的進(jìn)行，這表明，鹽度脅迫基因As-ClC在鹵蟲早期胚胎發(fā)育過(guò)程中可能參與細(xì)胞體積調(diào)節(jié)和滲透調(diào)節(jié)。因此了解抗逆耐鹽基因，對(duì)我們以后治理鹽堿化可能具有