對蝦吞噬調(diào)控相關(guān)的miR-1功能以及siRNA結(jié)合蛋白的研究.pdf

1、miRNAs是一類長度約20-24nt內(nèi)源的非編碼的單鏈小RNAs，從病毒到高等動植物普遍存在，通過轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá)，在生物系統(tǒng)發(fā)育、細(xì)胞分化、物質(zhì)代謝、腫瘤發(fā)生等多種生命過程中發(fā)揮著不可或缺的作用。為了探究吞噬相關(guān)的miRNAs，本研究設(shè)計專一性抑制微絲聚合的細(xì)胞松弛素B處理對蝦，影響細(xì)胞的吞噬活性，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行高通量miRNAs測序。比較對照組和試驗組的miRNAs差異序列，篩選到21條可能參與吞噬調(diào)控的miRNAs，為m

2、iRNAs調(diào)控吞噬的機(jī)制研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，有助于我們更深入的了解對蝦的吞噬機(jī)理。基于吞噬調(diào)控相關(guān)的miRNAS高通量測序數(shù)據(jù)，選取進(jìn)化上具有高度保守性、表達(dá)量也相對較高的miR-1，在對蝦和小鼠細(xì)胞Raw264.7中對其調(diào)控吞噬的機(jī)制進(jìn)行深入的試驗探究。研究發(fā)現(xiàn)，miR-1通過調(diào)控網(wǎng)格蛋白的表達(dá)影響細(xì)胞的吞噬過程，我們的研究結(jié)果增加了對miRNA吞噬調(diào)控機(jī)制和途徑的認(rèn)識。隨著對miR-1調(diào)控機(jī)制的研究深入，我們將在整個生物系統(tǒng)、網(wǎng)絡(luò)層面

3、綜合理解miR-1的功能。
　　 RNAi是由雙鏈RNA(dsRNA)引發(fā)的一種特異性基因沉默現(xiàn)象，尤其在無脊椎動物中，RNAi是一種重要的抗病毒機(jī)制，并有研究表明RNAi在對蝦體內(nèi)具有抗病毒效果。dsRNA經(jīng)Dicer裂解產(chǎn)生21bp的雙鏈siRNA，siRNA作為核心指導(dǎo)者和ago蛋白以及一些輔助蛋白通過一系列復(fù)雜的過程參與RISC(RNAinduced silencing complex)的形成。RISC裝配是一個復(fù)雜精細(xì)

4、的過程，參與其中的蛋白除了ago之外，還有dsRNA結(jié)合蛋白等輔助蛋白參與完成，然而這些研究尚不清楚。vp28-siRNA是21bp的雙鏈siRNA，靶向?qū)ξr白斑綜合癥病毒的膜蛋白編碼基因vp28。本研究在海洋生物對蝦中利用生物素鏈霉素親和系統(tǒng)篩選到vp28-siRNA互作蛋白精氨酸激酶，經(jīng)western blot和RNA免疫共沉淀表明siRNA確與精氨酸激酶存在互作。該部分試驗探究為進(jìn)一步闡明無脊椎動物中siRNA介導(dǎo)的RNAi的作用