仿刺參(Apostichopus japonicus)體腔液的抗菌特性.pdf

1、仿刺參（Apostichopus japonicus），又稱刺參，屬于棘皮動物門（Echinodemata），海參綱(Holothuroidea），楯手目(Aspidochirotidae），刺參科(Stichopodidae），仿刺參屬（Apostichopus），是我國重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖品種。為了解仿刺參體腔液的抗菌譜及不同二價金屬離子對其體腔液抗菌活性的影響，實驗采用生長曲線測定法來分別測定體腔液上清和體腔細(xì)胞破碎液上清對哈維氏弧菌（

2、Vibrio harveyi）、燦爛弧菌（Vibrio splendidus）、希瓦氏菌（Shewanella baltica）、假交替單胞菌（Pseudoalteromonas nigrifacien）、金黃色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus）、溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus）、停乳鏈球菌（Streptococcus dysgadysgalactiae）、擬諾卡式菌（Nocardio

3、psis sp.）等常見細(xì)菌生長的影響，并通過此法以溶壁微球菌為受試菌來測定海洋環(huán)境中常見的Mg2+、Mn2+、Ca2+、Fe2+、Zn2+、Cd2+對仿刺參體腔液上清抗菌活性的影響。
　　結(jié)果表明，仿刺參體腔細(xì)胞破碎液上清對上述8株細(xì)菌的生長都無抑制作用，體腔液上清僅對溶壁微球菌的生長有顯著的抑制作用，而對其余7株受試菌的生長沒有顯著影響；Mn2+和Zn2+能明顯增強(qiáng)體腔液上清對溶壁微球菌生長的抑制作用，而Mg2+、Ca2+、F

4、e2+、Cd2+則對體腔液上清的抗菌活性沒有明顯影響。研究結(jié)果表明，仿刺參體腔液在體外狀態(tài)下僅具有窄譜的抗菌活性，與抗菌相關(guān)的免疫因子則主要存在于體腔液上清中；體腔液中的免疫活性因子對海洋中常見的二價金屬離子有一定的適應(yīng)性，而且適當(dāng)濃度的Mn2+和Zn2+也許具有能增強(qiáng)仿刺參抗菌應(yīng)答能力的作用。
　　為了進(jìn)一步探索溶壁微球菌與其它不受仿刺參體腔液抑制的細(xì)菌之間、革蘭氏陽性與革蘭氏陰性細(xì)菌之間，以及不同種的細(xì)菌之間在引起仿刺參體腔液

5、中免疫因子應(yīng)答變化上是否有規(guī)律性的差異，將燦爛弧菌、哈維氏弧菌、假交替單胞菌、溶壁微球菌和停乳鏈球菌各自注射仿刺參，然后分別采用對硝基苯基磷酸酯底物法、氯化硝基四氮唑藍(lán)法、溶壁微球菌粉法和多巴絡(luò)合物生成法對體腔液上清中的酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）、超氧化物歧化酶（SOD）、溶菌酶（LYZ）和酚氧化酶（PO）的活力進(jìn)行了測定。結(jié)果表明：當(dāng)燦爛弧菌刺激后，ACP和AKP活力顯著升高，而SOD、LYZ和PO活力顯著降低；當(dāng)哈維

6、氏弧菌刺激后，ACP、SOD、LYZ和PO活力顯著升高，AKP活力變化不規(guī)律；當(dāng)假交替單胞菌刺激后，ACP、LYZ和PO活力顯著升高，SOD活力先升高后降低，AKP活力變化不規(guī)律；當(dāng)溶壁微球菌刺激后，ACP和PO活力顯著升高，SOD活力先升高后降低，LYZ活力先升高后降低，而后在72 h恢復(fù)至對照水平，AKP活力變化不規(guī)律；當(dāng)停乳鏈球菌刺激后，除AKP活力在4 h有所下降外，其余免疫相關(guān)酶活力均顯著升高。
　　研究結(jié)果表明，PO是

7、仿刺參非特異性免疫系統(tǒng)中最高效、敏感的免疫因子之一；在誘導(dǎo)仿刺參免疫因子應(yīng)答變化方面，革蘭氏陰性細(xì)菌和革蘭氏陽性細(xì)菌間沒有明顯的規(guī)律性差異；溶壁微球菌誘導(dǎo)LYZ的應(yīng)答變化與燦爛弧菌、哈維氏弧菌、假交替單胞菌和停乳鏈球菌存在明顯差異，LYZ可能是仿刺參清除入侵溶壁微球菌的主要免疫因子；燦爛弧菌誘導(dǎo)仿刺參免疫因子應(yīng)答變化顯著不同于其他4株細(xì)菌，顯示出本研究選取的5個免疫指標(biāo)在預(yù)警燦爛弧菌病害上具有潛在應(yīng)用價值；同樣地，在仿刺參中，停乳鏈球菌