CYP2S1基因?qū)θ私Y(jié)直腸癌SW480細(xì)胞增殖及遷移的影響.pdf

1、結(jié)直腸癌(Colorectal cancer,CRC)是全世界范圍內(nèi)最常見的腫瘤之一，在過去的幾十年，由生活環(huán)境、飲食習(xí)慣等因素的改變，其發(fā)病率逐年上升且有年輕化趨勢(shì)。盡管手術(shù)切除是治愈結(jié)直腸癌的主要手段，但是不良預(yù)后仍然是難以解決的問題，依然有超過40％的結(jié)直腸癌患者最終死于腫瘤轉(zhuǎn)移。因此尋求一種改善不良預(yù)后的有效治療方法顯得尤為重要。CYP2S1是 CYP450家族的一種單加氧酶，位于19q13.1，共包含9個(gè)外顯子。CYP2S1參

2、與內(nèi)源性或外源性致癌物的新陳代謝從而維持機(jī)體穩(wěn)定。本實(shí)驗(yàn)利用shRNA特異性沉默人結(jié)直腸癌SW480細(xì)胞中CYP2S1基因，構(gòu)建穩(wěn)定沉默CYP2S1基因的細(xì)胞系。通過檢測(cè)其增殖和遷移情況，探討CYP2S1對(duì)細(xì)胞增殖及遷移的影響。使用不同濃度奧沙利鉑誘導(dǎo)SW480細(xì)胞，檢測(cè)奧沙利鉑對(duì)CYP2S1表達(dá)量及細(xì)胞增殖的影響。本研究包括以下兩個(gè)部分：
　　1.CYP2S1基因?qū)Y(jié)直腸癌SW480細(xì)胞增殖及遷移的影響
　　通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染

3、法獲得穩(wěn)定沉默CYP2S1基因的細(xì)胞系，采用Western blot和Q-PCR檢測(cè)CYP2S1基因的沉默效率；臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù)法、CCK-8法和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CYP2S1基因?qū)?xì)胞增殖的影響；劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CYP2S1基因?qū)?xì)胞遷移的影響。結(jié)果顯示，與野生型細(xì)胞相比，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖及遷移的速度加快，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中β-catenin表達(dá)量有所上升。據(jù)此推測(cè)，CYP2S1的表達(dá)量的下調(diào)可能會(huì)導(dǎo)致Wnt/β-

4、catenin信號(hào)通路中β-catenin的積累，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞增殖及遷移。
　　2.奧沙利鉑對(duì)結(jié)直腸癌SW480細(xì)胞增殖的影響
　　通過CCK-8法檢測(cè)不同濃度奧沙利鉑對(duì) SW480細(xì)胞增殖的抑制作用，使用Western blot檢測(cè)奧沙利鉑對(duì)CYP2S1基因表達(dá)量的影響。結(jié)果顯示，隨誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)或藥物濃度的增加，奧沙利鉑對(duì)SW480細(xì)胞的抑制作用逐漸增強(qiáng)，呈時(shí)間-濃度依賴性。與野生型細(xì)胞相比，奧沙利鉑誘導(dǎo)后細(xì)胞CYP2S