血清蛋白質(zhì)組分析技術(shù)篩選鼻咽癌新自身抗體及其診斷價(jià)值研究.pdf

1、目的：
　　鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma，NPC）是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，具有高度的侵襲性和轉(zhuǎn)移性，其中以中國(guó)廣東和廣西兩省發(fā)病率最高，達(dá)到25-40/10萬(wàn)人/年。早期鼻咽癌患者的5年生存率高達(dá)95％，而晚期患者生存率不到75%。用于篩查和輔助診斷鼻咽癌的血清標(biāo)志物主要是EB病毒相關(guān)抗體（如VCA-IgA）或EB病毒DNA（EBV-DNA），但這些檢測(cè)方法的敏感度及特異度仍不夠理想。由于缺乏早期的篩

2、查方法，臨床上鼻咽癌診斷時(shí)往往已到中晚期階段，嚴(yán)重影響治療效果。最近有研究表明，某些腫瘤相關(guān)抗原的自身抗體在腫瘤早期，甚至是癌前病變階段就已在患者血清中出現(xiàn)，檢測(cè)其含量可能成為早期腫瘤診斷方法；并且，多種腫瘤自身抗體聯(lián)合檢測(cè)可以顯著提高檢測(cè)的敏感度。我們先前研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤自身抗體是鼻咽癌潛在的早期診斷分子標(biāo)志物?；诖?，本研究擬通過(guò)應(yīng)用血清蛋白質(zhì)組分析技術(shù)，篩選新的鼻咽癌自身抗體分子標(biāo)志物，并進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)驗(yàn)

3、證自身抗體在鼻咽癌中的診斷價(jià)值；最后，聯(lián)合VCA-IgA，建立新的自身抗體聯(lián)合 VCA-IgA鼻咽癌診斷模型。通過(guò)本研究，可為鼻咽癌早期診斷提供新的分子標(biāo)志物，彌補(bǔ)檢測(cè) EB病毒在鼻咽癌診斷方面的不足，進(jìn)一步提高鼻咽癌早期診斷率。
　　方法：
　　收集汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院7例鼻咽癌患者和7例年齡性別匹配的正常人血清標(biāo)本。培養(yǎng)人鼻咽癌細(xì)胞CNE2，提取CNE2總蛋白，運(yùn)用血清蛋白質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)，即將CNE2總蛋白經(jīng)雙向電

4、泳分離后，凝膠進(jìn)行銀染或轉(zhuǎn)膜后做免疫印跡（以鼻咽癌患者血清和正常人血清作為一抗），比較差異表達(dá)蛋白點(diǎn)，取差異蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，篩選可以誘導(dǎo)鼻咽癌患者產(chǎn)生自身抗體的腫瘤相關(guān)抗原。應(yīng)用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），檢測(cè)汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院129例鼻咽癌患者和100例正常對(duì)照者血清中自身抗體和 VCA-IgA的水平，聯(lián)合運(yùn)用受試者工作特征（ROC）曲線和 logistics回歸分析，評(píng)價(jià)新鑒定的自身抗體分子標(biāo)志物在鼻咽癌中的診斷

5、價(jià)值，以及新的EB病毒抗體-自身抗體模型在鼻咽癌中的聯(lián)合診斷價(jià)值。
　　結(jié)果：
　　血清蛋白質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)，篩選鑒定了PRDX2、PRDX3、Nucleoside diphosphate kinase、ENO1、HSPA8、Serine-threonine kinase receptor-associated protein、HSPD1、Serpin B5、L-lactate dehydrogenase B、Gamma-gl

6、utamylcyclotransferase、Vimentin、Isoform2 of Macrophage-capping protein、Annexin A2等14種鼻咽癌潛在的腫瘤相關(guān)抗原。在此基礎(chǔ)上，我們采用間接ELISA，檢測(cè)分析了PRDX2自身抗體和PRDX3自身抗體在129例鼻咽癌患者和100例正常對(duì)照者血清中的水平，結(jié)果顯示PRDX2自身抗體和PRDX3自身抗體在鼻咽癌患者組血清中的水平均顯著高于正常對(duì)照組（P<0.01

7、）。ROC曲線分析顯示，在鼻咽癌中，PRDX2和PRDX3自身抗體的診斷敏感度分別為26.4%和24.5%，特異度分別為96.0%和95.0%，曲線下面積分別為0.614（95%置信區(qū)間為0.542-0.686）和0.600（95%置信區(qū)間為0.528-0.673）；RDX2自身抗體和PRDX3自身抗體聯(lián)合檢測(cè)對(duì)鼻咽癌的診斷敏感度為36.4%，特異度為95.0%，曲線下面積為0.632（95%置信區(qū)間為：0.561-0.703），對(duì)早期

8、鼻咽癌的診斷敏感度為40.0%，特異度為95.0%，曲線下面積0.664（95%置信區(qū)間為0.550-0.779）；聯(lián)合檢測(cè)PRDX2自身抗體、PRDX3自身抗體和VCA-IgA進(jìn)一步提高了對(duì)鼻咽癌的診斷效能，敏感度66.7%，特異度95.0%，曲線下面積為0.811（95%置信區(qū)間為0.753–0.869），對(duì)早期鼻咽癌的診斷敏感度50.0%，特異度95.0%，曲線下面積為0.754（95%置信區(qū)間為0.652–0.857）。

9、　　結(jié)論：
　?、胚\(yùn)用血清蛋白質(zhì)組學(xué)方法，我們篩選鑒定了PRDX2、PRDX3、Nucleoside diphosphate kinase、ENO1、HSPA8、Serine-threonine kinase receptor-associated protein、HSPD1、Serpin B5、L-lactate dehydrogenase B、Gamma-glutamylcyclotransferase、Vimentin、Is

10、oform2 of Macrophage-capping protein、Annexin A2等14種潛在的腫瘤相關(guān)抗原，提示針對(duì)這些腫瘤相關(guān)抗原的自身抗體可能是鼻咽癌潛在的診斷分子標(biāo)志物。⑵PRDX2自身抗體和PRDX3自身抗體在鼻咽癌患者血清中水平升高，可能作為鼻咽癌潛在的診斷分子標(biāo)志物。⑶相對(duì)于單獨(dú)檢測(cè)，PRDX2自身抗體、PRDX3自身抗體和 VCA-IgA的聯(lián)合檢測(cè)進(jìn)一步提高了對(duì)鼻咽癌的診斷效能，證實(shí)自身抗體和VCA-IgA聯(lián)