骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療大鼠痛風(fēng)腎.pdf

1、目的：
　　探討經(jīng)鼠尾靜脈移植的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BM-MSCs）對(duì)大鼠痛風(fēng)腎的影響，具體為延緩上皮到間葉組織轉(zhuǎn)化(EMT)、促進(jìn)腎臟細(xì)胞分化和生長(zhǎng)，以及抗氧化應(yīng)激等方面的作用。并進(jìn)一步研究其相應(yīng)的機(jī)制。
　　方法：
　　1、取36只幼年雄性Wistar大鼠，質(zhì)量（90±10）g，隨機(jī)分成兩組，一組12只，為正常組；另一組24只，為造模組，造模組采用腺嘌呤200mg/kg/d灌胃4周制作痛風(fēng)腎大鼠模型。
　　2、

2、確保痛風(fēng)腎模型制作成功后，造模組隨機(jī)分成兩組，分別為即將接受骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BM-MSCs）移植的治療組，與即將接受磷酸鹽緩沖液（PBS）注射的對(duì)照模型組?，F(xiàn)有三組大鼠，即為正常組、治療組和對(duì)照模型組。
　　3、在造模的同時(shí)，取幼年雄性Wistar大鼠6只，質(zhì)量為（50±10）g，犧牲大鼠取其股骨和脛骨的骨髓，經(jīng)密度梯度離心法和貼壁篩選法體外培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，經(jīng)過(guò)流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞表型進(jìn)行檢測(cè)，以及對(duì)細(xì)胞形態(tài)觀察、細(xì)胞多項(xiàng)分化

3、潛能的鑒定，確定培養(yǎng)的細(xì)胞為大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。
　　4、造模成功后，經(jīng)眼眶取血和留取24小時(shí)尿，測(cè)量各組的腎功能指標(biāo)尿素氮和肌酐和24小時(shí)尿蛋白。24小時(shí)后治療組于經(jīng)鼠尾靜脈移植入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BM-MSCs），同時(shí)對(duì)照模型組經(jīng)鼠尾靜脈注入相同量的磷酸鹽緩沖液（PBS）。
　　5、移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞6周后，收集大鼠的血液和尿液標(biāo)本用來(lái)測(cè)定血肌酐、尿素氮和24小時(shí)尿蛋白含量；犧牲大鼠取其腎臟做石蠟標(biāo)本，對(duì)石蠟標(biāo)本切片

4、進(jìn)行H-E染色、糖原染色和馬松染色，觀察并半定量評(píng)分評(píng)價(jià)各組腎臟病理情況。
　　6、免疫組織化學(xué)法測(cè)定大鼠腎臟石蠟標(biāo)本切片中的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)的表達(dá)水平，蛋白免疫印跡法（Western-Blot法）測(cè)定腎組織中P38、P-P38、硫氧還蛋白還原酶1（TrxR1）的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1、經(jīng)腺嘌呤誘導(dǎo)制作的痛風(fēng)腎大鼠相比正常組大鼠出現(xiàn)明顯的腎功能降低，大量蛋白尿，大體標(biāo)本呈“大白腎”，形態(tài)學(xué)可見(jiàn)腎

5、間質(zhì)和腎小管尿酸結(jié)晶沉積，腎間質(zhì)纖維化、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、腎小管上皮細(xì)胞壞死等，提示痛風(fēng)腎模型制造成功，并出現(xiàn)了慢性腎功能衰竭(CRF)。
　　2、體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BM-MSCs），經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示其表面 CD90高表達(dá)，CD45抗原低表達(dá)。經(jīng)成脂和成骨誘導(dǎo)成功，出現(xiàn)紅色脂滴和紅色鈣化結(jié)節(jié)。證明成功培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。
　　3、移植BM-MSCs后，治療組較模型組而言，腎功能明顯改善，尿素氮和肌酐水平降低，24