A20在幽門螺桿菌相關(guān)性胃炎中的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　本研究旨在檢測(cè)H.pylori感染組織及細(xì)胞中A20及miR-29a-3p的表達(dá)差異，明確在H.pylori感染中H.pylori、miR-29a-3p、A20三者間的作用關(guān)系，探索A20在H.pylori感染相關(guān)性胃炎發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制，有望為臨床H.pylori感染相關(guān)性胃炎的分子診斷及靶向治療提供新的依據(jù)和思路。
　　方法：
　　采用IHC及qRT-PCR的方法檢測(cè)H.pylori感染胃黏膜組織中A

2、20、miR-29a-3p的表達(dá)，Western blot及qRT-PCR分析H.pylori感染細(xì)胞模型中A20、miR-29a-3p的表達(dá)。運(yùn)用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)miR-29a-3p的靶基因，通過Luciferase和Western blot驗(yàn)證miR-29a-3p的靶基因。miR-29a-3p mimics轉(zhuǎn)染細(xì)胞后再感染 H.pylori， Western blot分析H.pylori、A20、miR-29a-3p三者間的作用關(guān)

3、系。采用基因干擾、過表達(dá)技術(shù)分別沉默和過表達(dá)A20，Western blot檢測(cè)phosphorylated NF-κB p65及NF-κB p65的表達(dá)，免疫熒光分析NF-κB p65核轉(zhuǎn)位，qRT-PCR和ELISA分析NF-κB下游炎癥因子IL-6和IL-8的表達(dá)。同時(shí)將基因干擾和H.pylori感染相結(jié)合，初步探索A20在H.pylori感染相關(guān)性胃炎中的作用機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　相對(duì)于H.pylori感染陰性的正

4、常胃黏膜或輕度胃炎組織，A20在H.pylori感染陽(yáng)性的胃炎或潰瘍組織中表達(dá)顯著降低，體外H.pylori感染細(xì)胞模型中顯示了一致的結(jié)果，并且A20表達(dá)降低具有H.pylori感染時(shí)間和濃度依賴性。而miR-29a-3p在H.pylori感染陽(yáng)性的胃炎或潰瘍組織中表達(dá)上調(diào)，在體外H.pylori感染細(xì)胞模型中miR-29a-3p表達(dá)也增加且具有H.pylori感染濃度依賴性。A20被預(yù)測(cè)驗(yàn)證為miR-29a-3p的靶基因，在H.pyl

5、ori感染中H.pylori通過上調(diào)miR-29a-3p表達(dá)進(jìn)而使A20表達(dá)水平降低。過表達(dá)A20能增強(qiáng)phosphorylated NF-κB p65的表達(dá)及NF-κB p65核轉(zhuǎn)位，同時(shí)增加NF-κB下游炎癥因子IL-6和IL-8的表達(dá)，而沉默A20表達(dá)后，則能相應(yīng)地抑制NF-κB p65的活化及其下游炎癥因子的表達(dá)。相對(duì)于H.pylori感染組，IL-6和IL-8在A20沉默后再感染H.pylori組中的表達(dá)水平降低，表明沉默A2

6、0能抑制H.pylori感染所誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。
　　結(jié)論：
　　A20在H.pylori感染組織及細(xì)胞中表達(dá)降低，而miR-29a-3p在H.pylori感染組織及細(xì)胞中表達(dá)增加，A20是miR-29a-3p的直接靶基因，在H.pylori感染中H.pylori通過上調(diào)miR-29a-3p表達(dá)進(jìn)而使A20表達(dá)水平降低。A20表達(dá)降低能抑制NF-κB活化及其下游炎癥因子的表達(dá)，提示A20表達(dá)下調(diào)可能在H.pylori感染中起到