甲狀旁腺激素對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化的影響.pdf

1、目的：
　　1.大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)，觀察其形態(tài)特征及鑒定表面標(biāo)志物。
　　2.對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化和成骨分化進(jìn)行研究。
　　3.觀察不同濃度PTH1-34對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化的影響，探討其可能機(jī)制。
　　方法：
　　1.采用貼壁法分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)，觀察其形態(tài)、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，流式細(xì)胞儀檢測(cè)表面標(biāo)志物及細(xì)胞周期。
　　2.誘導(dǎo)BMSCs定向分化為

2、脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞，并通過(guò)組織染色法鑒定分化后的細(xì)胞。
　　3.以第三代BMSCs為體外試驗(yàn)?zāi)Ｐ停煌瑵舛燃谞钆韵偌に兀≒TH1-34）（0、10-10、10-9、10-8mol/L）分別作用于加入成脂誘導(dǎo)液的BMSCs，14天后采用ELISA法測(cè)定LPL活性，采用RT-PCR法測(cè)定ALP和PPARγ-2 mRNA表達(dá)水平，觀察不同濃度PTH1-34對(duì)BMSCs成脂分化的影響。
　　4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS13.

3、0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料的表示用X?S，采用方差分析和LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行各組間比較，P<0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.BMSCs貼壁生長(zhǎng)，均一長(zhǎng)梭形，生長(zhǎng)曲線為“S”型。細(xì)胞周期測(cè)定大部分處于G1/G0期。P3代BMSCs陽(yáng)性表達(dá)CD44、CD29，陰性表達(dá)CD45。
　　2.成脂誘導(dǎo)液誘導(dǎo)BMSCs分化21天后，油紅O染色可見(jiàn)胞內(nèi)脂滴出現(xiàn)，成骨誘導(dǎo)28天后，茜素紅染色可見(jiàn)鈣結(jié)節(jié)。
　　3.不

4、同濃度PTH1-34（10-10、10-9、10-8、mol/L）分別作用于BMSCs后，與未加入PTH1-34的對(duì)照組比較，LPL、PPARγ-2的表達(dá)量下降，ALP活性明顯增加，并呈劑量依賴(lài)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.BMSCs形態(tài)為均一長(zhǎng)梭形；穩(wěn)定表達(dá)CD44、CD29，不表達(dá)CD45；BMSCs具有向脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞分化的潛能。
　　2.PTH1-34抑制BMSCs成脂分化，促