siRNA沉默HIF-1α、HIF-2α、HIF-1β在不同缺氧狀態(tài)下對(duì)BGC-823胃癌細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察不同缺氧條件下胃腺癌細(xì)胞系BGC-823中HIF-1α、HIF-2α、HIF-1β和VEGF的表達(dá)，探討三種HIF因子在低氧條件下調(diào)控胃癌血管生成的作用差異。
　　方法：分別用150、200、250、275μmol/L CoCl2模擬腫瘤內(nèi)部缺氧，缺氧時(shí)間分別為：2h、4h、8h、12h、24h、48h、72h。采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time PCR）和Western blot法檢測(cè)HIF-1α、HIF-2

2、α、HIF-1β和VEGF的mRNA及蛋白表達(dá)情況。進(jìn)一步運(yùn)用RNA干擾(RNA interference, RNAi)技術(shù)采用小干擾RNA（small interfering RNA，siRNA）沉默BGC-823細(xì)胞，比較三者沉默VEGF的效果。
　　結(jié)果：⑴與常氧時(shí)比較，缺氧后HIF-1α、HIF-2α、VEGF的mRNA及蛋白表達(dá)均隨CoCl2濃度增加、時(shí)間延長(zhǎng)而增加，但三者變化趨勢(shì)不一致， HIF-1α在缺氧早期迅速升高

3、，之后快速下降；HIF-2α和VEGF則在缺氧晚期表達(dá)最高，之后保持穩(wěn)定。HIF-1βmRNA和蛋白在常氧或缺氧下表達(dá)均無(wú)明顯變化（P>0.05）。⑵細(xì)胞分別特異性轉(zhuǎn)染 HIF-1α、HIF-2α和HIF-1βsiRNA后均能有效沉默各自基因的表達(dá)，同時(shí)VEGF的表達(dá)水平也隨之降低，且隨HIF-2α的下調(diào)幅度最顯著（P<0.05）。
　　結(jié)論：①BGC-823胃癌細(xì)胞中HIF-1α、HIF-2α和HIF-1β對(duì)乏氧刺激表現(xiàn)出不同的