鯉魚卵半胱氨酸蛋白酶抑制劑的分離純化、部分性質(zhì)分析和基因克隆.pdf

1、半胱氨酸蛋白酶抑制劑( cystatin protease inhibitor,CPI)是一類分子量較小、能夠抑制半胱氨酸內(nèi)肽酶的天然蛋白酶抑制劑。在機體免疫防御機制方面發(fā)揮重要的作用。廣泛地存在于動物、植物及微生物中。CPIs在醫(yī)藥、食品加工、植物抗蟲抗病及寄生蟲的免疫逃避機制等領域中擁有潛在的使用價值。鯉魚(Cyprinus carpio)屬于鯉科鯉屬的脊椎動物，本課題以鯉魚卵為實驗材料，通過生物化學與分子生物學的實驗技術，分析了蛋

2、白酶抑制劑的抑制活性。分離純化獲得一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑，并對其蛋白酶抑制活性及理化性質(zhì)進行了研究。文章主要內(nèi)容和結果如下：
　　選取了五種蛋白酶(凝血酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶和胰凝乳蛋白酶)及其特異性發(fā)色底物利用比色法檢測它們對四種常見魚卵(鯉魚、鰱魚、青魚和鱸魚)的蛋白酶抑制活性，結果顯示除胰凝乳蛋白酶和木瓜蛋白酶外，對其余3種蛋白酶都具有較好的抑制效果，說明四種魚卵中確實存在有效的蛋白酶抑制劑；利用Seph

3、adex G50、Sephadex G75凝膠過濾、反相高效液相等生物技術方法從鯉魚卵中分離純化出了一個純化倍數(shù)為117倍的蛋白；分別檢測了鯉魚卵蛋白酶抑制劑的熱穩(wěn)定性和酸堿穩(wěn)定性，結果顯示將溫度上升到80℃時，鯉魚卵cystatin則失去抑制活性；而鯉魚卵cystatin酸堿穩(wěn)定性較好。對于嗜水氣單胞菌和枯草芽孢桿菌的抑菌試驗則顯示一定程度的抑菌效果。
　　采用RACE方法從鯉魚卵中克隆出了cystatin基因的cDNA序列，基