碧蘿芷在大鼠脊髓損傷后的神經(jīng)保護(hù)作用.pdf

1、目的:脊髓損傷（spinal cord injury，SCI）是脊柱骨折最嚴(yán)重的并發(fā)癥，導(dǎo)致?lián)p傷平面以下運(yùn)動(dòng)和感覺功能喪失，出現(xiàn)嚴(yán)重的功能障礙，給患者的身心以及社會(huì)帶來巨大的負(fù)擔(dān)，隨著我國(guó)交通和建筑業(yè)的發(fā)展，SCI的發(fā)病率呈逐年升高的趨勢(shì)。SCI后的病理生理機(jī)制復(fù)雜，臨床治療效果非常有限，這使得脊髓損傷的治療成為臨床和科研所面臨的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)之一。本課題將從脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞損傷的病理生理機(jī)制入手，尋找新的治療靶點(diǎn)、探索新的藥物以便為將來臨

2、床改善脊髓損傷后運(yùn)動(dòng)感覺功能的恢復(fù)奠定一定的基礎(chǔ)。
　　研究方法:本課題利用SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，采用改良Allen's法（背側(cè)撞擊法），建立脊髓損傷的動(dòng)物模型。碧蘿芷(PYC)是一種從法國(guó)沿海松樹皮中提取的天然黃酮類化合物，具有很強(qiáng)的抗氧化作用。已有多個(gè)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，天然黃酮類化合物能夠通過清除氧自由基并調(diào)節(jié)多種細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路對(duì)機(jī)體的各個(gè)器官起到保護(hù)作用并且能夠通過血腦屏障作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)。本次試驗(yàn)是在大鼠脊髓損傷后15分鐘通過腹

3、腔給予一定劑量的藥物予以保護(hù)，觀察其療效。利用HE染色及尼氏染色檢測(cè)PYC對(duì)于脊髓損傷后組織及神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用。BBB評(píng)分檢測(cè)PYC是否能夠促進(jìn)大鼠脊髓損傷后后肢運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)，比色法檢測(cè)脊髓損傷后72h PYC對(duì)于氧化應(yīng)激指標(biāo)SOD，MDA的影響。IHC定位檢測(cè)和Western Blot定量檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Cleaved-Caspase3、bcl-2、bax的表達(dá)，判斷細(xì)胞凋亡情況及PYC的抗凋亡作用。為了進(jìn)一步探討PYC是否抑制了

4、線粒體凋亡通路，我們使用JC-1熒光探針及流式細(xì)胞儀分析了脊髓損傷后72h線粒體膜電位(△Ψm)的變化并通過Western blot檢測(cè)胞漿內(nèi)Cyt-c的表達(dá)。
　　結(jié)果:HE染色及尼氏染色證實(shí)了PYC對(duì)于脊髓損傷后的組織及細(xì)胞具有保護(hù)作用。Basso-Beattie-Bresnahan評(píng)分證實(shí)了PYC改善了脊髓損傷后大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能。通過比色法我們觀察到PYC減少了脊髓組織中MDA的生成并提高了SOD的活性，這說明PYC減輕了脊

5、髓損傷后的氧化應(yīng)激損傷。脊髓損傷后，活化的自由基攻擊線粒體膜，大量Ca2+流入導(dǎo)致線粒體腫脹，膜電位MMP降低，從而導(dǎo)致線粒體膜破裂，細(xì)胞色素C釋放入胞漿，激活線粒體凋亡通路，最終導(dǎo)致神經(jīng)元發(fā)生凋亡。通過IHC和Western Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PYC能夠下調(diào)凋亡蛋白Cleaved-Caspase3，Bax表達(dá)，上調(diào)Bcl-2蛋白的表達(dá)，此外，PYC還提高了SCI后線粒體膜電位，減少了胞漿內(nèi)Cyt-c的表達(dá)。
　　結(jié)論:作為天然抗氧