貴陽常見嗜尸性蠅類生活史和蛹期轉錄組學研究.pdf

1、目的：
　　觀察貴陽地區(qū)夏季瘦葉帶綠蠅（Hemipyrellia ligurriens）、廄腐蠅（Muscina stabulans）、臺灣別麻蠅（Boettcherisca formosensis）在室內自然條件下生活史與積溫的關系；探討棕尾別麻蠅（Boettcherisca peregrine）蛹3個不同發(fā)育時間轉錄組的差異表達，為進一步探究棕尾別麻蠅蛹各個時間轉錄組中的差異基因提供實驗數據。
　　方法：
　　1.

2、于貴州醫(yī)科大學和貴州警官職業(yè)學院兩地，分別放置家兔尸體誘捕臺灣別麻蠅、廄腐蠅、瘦葉帶綠蠅3種嗜尸性蠅類進行飼養(yǎng)直至產卵，觀察3種嗜尸性蠅類在貴陽地區(qū)夏季自然條件下各發(fā)育階段的歷期并記錄溫、濕度。2.于貴州醫(yī)科大學室外放置實驗用家兔尸體，采集棕尾別麻蠅進行人工飼養(yǎng)。待其產下幼蟲至化蛹后，每24 h收集一次蠅蛹，每次2粒，直至羽化出成蟲，選取第1、5、10天收集的蠅蛹，提取總RNA測序進行文庫構建，使用軟件edgeR對基因差異表達進行分析，

3、篩選差異基因做實時熒光定量驗證，對已知基因（Unigene）進行京都數據庫（KEGG）代謝通路分析，使用MISA對Unigene進行簡單重復序列(SSR)檢測。
　　結果：
　　1.臺灣別麻蠅6月、7月、8月發(fā)育歷期為17.00d、15.19d、15.7d；廄腐蠅6月、7月發(fā)育歷期為16.13d、13.9d；瘦葉帶綠蠅7月發(fā)育歷為13.06d。其中廄腐蠅與瘦葉帶綠蠅在7月發(fā)育歷期相似；廄腐蠅6月、7月發(fā)育歷期時間和臺灣別麻蠅

4、6月與7月、8月發(fā)育歷期有差異。統(tǒng)計出3種嗜尸性蠅類的發(fā)育總歷期和積溫的基礎數據。2.獲得各分組樣品基因組表達水平，共捕獲38727條Unigenes，將不同時間的蠅蛹轉錄組結果構建數據庫進行兩兩比較，差異基因總數為5283，將差異表達基因進行可視化散點圖和火山圖構建以及模式聚類構建，對差異基因GO分類統(tǒng)計和富集分析并將差異性明顯的酪氨酸羥化酶（TH）基因與CBM-14基因篩選出來做實時熒光定量與測序結果一致。棕尾別麻蠅蛹轉錄組共有88

5、56個 Unigene被注釋，被注釋的代謝通路有336個。SSR查找發(fā)現，從Unigene中共查找到SSR位點占總比例的22.32%。其中，單核苷酸重復所占比例最高，其次是三核苷酸重復。SSR不同重復基元類型中，出現頻率最高的為A/T，其次是AAC/GTT，AC/GT。
　　結論：
　　1.廄腐蠅、臺灣別麻蠅、瘦葉帶綠蠅的發(fā)育歷期與溫度變化有關，并獲得三種嗜尸性蠅類的生活史數據。2.構建貴陽地區(qū)棕尾別麻蠅蛹3個不同發(fā)育時間的