姜黃素干預(yù)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者破骨細(xì)胞生成中NF-κB信號(hào)通路的機(jī)制研究.pdf

1、目的:觀察姜黃素(Curcumin，Cur)對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)患者破骨細(xì)胞生成的影響，探索核因子-κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)信號(hào)通路在此過程中的調(diào)節(jié)機(jī)制，為姜黃素應(yīng)用于RA骨破壞的防治提供理論依據(jù)。
　　方法:(1)分離RA患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)誘導(dǎo)培養(yǎng)為破骨細(xì)胞，在

2、培養(yǎng)過程中給予不同濃度姜黃素進(jìn)行干預(yù);(2)分組:Control組、Cur2.5μM組、Cur5μM組、Cur10μM組，姜黃素的濃度分別為0、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L;(3)誘導(dǎo)培養(yǎng)14天后進(jìn)行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP)染色標(biāo)記成熟破骨細(xì)胞，并行細(xì)胞計(jì)數(shù);(4) Western Blot檢測(cè)各組細(xì)胞中IκBα、p-IκBα蛋白的表達(dá)

3、;(5) Western Blot檢測(cè)細(xì)胞漿和細(xì)胞核中NF-κB p65的表達(dá);(6)細(xì)胞免疫熒光染色法觀察NF-κB p65核易位。
　　結(jié)果:(1)培養(yǎng)14天后，各組細(xì)胞均符合破骨細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征;(2) TRAP染色結(jié)果顯示，與Control組相比，Cur2.5μM組、Cur5μM組和Cur10μM組TRAP陽性細(xì)胞數(shù)均明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);(3) Western Blot結(jié)果顯示，與Control組

4、相比，Cur2.5μM組、Cur5μM組和Cur10μM組IκBα的蛋白表達(dá)水平明顯升高，p-IκBα的表達(dá)水平明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);(4)與Control組相比，Cur2.5μM組、Cur5μM組和Cur10μM組細(xì)胞漿中NF-κB p65的表達(dá)水平明顯升高，而細(xì)胞核中NF-κB p65的表達(dá)水平明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);(5)細(xì)胞免疫熒光染色結(jié)果顯示，在未刺激狀態(tài)下NF-κB p65主要分