白紋伊蚊感染寨卡病毒和登革病毒的媒介能力研究.pdf

1、背景:
　　寨卡病毒(zika virus，ZIKV)和登革病毒(dengue virus，DENV)是近年來流行較廣的蚊媒病毒，可致小頭癥、格林-巴利綜合征、登革出血熱和登革休克綜合征等嚴(yán)重危害。了解中國(guó)能傳播ZIKV的蚊媒，明確溫度對(duì)白紋伊蚊傳播DENV-2的媒介能力的影響，對(duì)蚊媒疾病的防控具有指導(dǎo)意義。
　　目的:
　　建立ZIKV和DENV-2感染的細(xì)胞和蚊蟲模型，明確中國(guó)埃及伊蚊、白紋伊蚊和致倦庫(kù)蚊感染ZIK

2、V的媒介能力;對(duì)比不同溫度下白紋伊蚊感染DENV-2的媒介能力差異。
　　方法:
　　qRT-PCR對(duì)比Vero、C6/36、Aag2細(xì)胞和乳鼠富集ZIKV的效果;間接免疫熒光確定ZIKV的位置;病毒全細(xì)胞懸液、上清液和細(xì)胞裂解后的上清液分別與羊血混合喂食白紋伊蚊，確定ZIKV的收集方式;根據(jù)最佳條件感染白紋伊蚊，RT-PCR和qRT-PCR檢測(cè)蚊蟲感染ZIKV情況。埃及伊蚊、白紋伊蚊和致倦庫(kù)蚊感染ZIKV，于感染后0d、4

3、d、7d、10d和14d檢測(cè)整只蚊蟲的ZIKV感染情況和病毒量;另外感染一批蚊蟲，于上述各時(shí)間點(diǎn)解剖蚊蟲中腸、頭、唾液腺和卵巢，檢測(cè)各組織的感染情況和病毒量。C6/36細(xì)胞感染DENV-2，觀察細(xì)胞病變效應(yīng);RT-PCR、TCID50和間接免疫熒光檢測(cè)DENV-2及其滴度;新鮮的病毒上清液與羊血混合喂食白紋伊蚊，RT-PCR檢測(cè)蚊蟲攜帶DENV-2的情況。吸食DENV-2血餐的白紋伊蚊置于18℃、23℃、28℃和32℃飼養(yǎng)，于感染后0d

4、、5d、10d和15d檢測(cè)白紋伊蚊中腸、卵巢和唾液腺的DENV-2和病毒量;免疫組化觀察32℃、15d的蚊蟲中腸和唾液腺。
　　結(jié)果:
　　C6/36細(xì)胞感染ZIKV于28℃、5d的病毒滴度最高;全細(xì)胞病毒懸液與羊血混合喂食白紋伊蚊效果最佳;白紋伊蚊感染ZIKV的陽(yáng)性率為27.27％～30.77％，且病毒滴度逐漸增高。埃及伊蚊和白紋伊蚊在感染后各時(shí)間點(diǎn)保持較高的感染率且病毒滴度逐漸升高，致倦庫(kù)蚊僅在4d和7d檢測(cè)到少量的感染

5、和極低的病毒量，7d后未檢測(cè)到感染;ZIKV在感染后4d可在埃及伊蚊唾液腺檢測(cè)到病毒，在白紋伊蚊則需要10d。C6/36細(xì)胞感染DENV-2置于37℃，2d則出現(xiàn)空泡化，RT-PCR、TCID50和間接免疫熒光證實(shí)細(xì)胞感染成功;喂食白紋伊蚊，有不同程度的蚊蟲感染DENV-2。18℃，DENV-2僅在中腸內(nèi)緩慢增殖，不能播散至唾液腺。18℃～32℃，隨著溫度的升高，其播散至卵巢和唾液腺的時(shí)間越短，23℃和28℃需要10d，而32℃，5d侵

6、入唾液腺。免疫組化可觀察到中腸和唾液腺內(nèi)的病毒抗原。
　　結(jié)論:
　　C6/36細(xì)胞為富集ZIKV和DENV-2的理想細(xì)胞，兩種病毒均能成功感染白紋伊蚊。中國(guó)分布的埃及伊蚊和白紋伊蚊可傳播ZIKV，而致倦庫(kù)蚊不能作為ZIKV的傳播媒介。白紋伊蚊的媒介能力較埃及伊蚊差，但其在中國(guó)廣泛分布，白紋伊蚊可能成為中國(guó)傳播ZIKV的主要媒介。溫度是影響白紋伊蚊感染DENV-2媒介能力的重要因素，18℃～32℃，溫度越高，病毒在白紋伊蚊增