TO901317通過LXRα-NF-κB p65-cyclinD1途徑抑制人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖.pdf

1、目的:
　　探討肝X受體的人工合成激動(dòng)劑 TO901317抑制乳腺癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制，旨在為今后乳腺癌的分子靶向治療提供新的思路。
　　方法
　　1.不同濃度的TO901317處理MCF-7細(xì)胞不同時(shí)間后采用MTT法檢測(cè)對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的作用，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)對(duì)細(xì)胞周期的影響；western blot檢測(cè)LXRα、NF-κB p65及cyclinD1等在MCF-7細(xì)胞中的蛋白表達(dá)。
　　2.運(yùn)用RNA干擾技術(shù)

2、沉降MCF-7細(xì)胞中LXRα的表達(dá)，MTT法檢測(cè)TO901317對(duì)LXRαsiRNA轉(zhuǎn)染的MCF-7細(xì)胞增殖的作用，western blot檢測(cè)細(xì)胞中LXRα、NF-κB p65和cyclinD1蛋白表達(dá)的改變，間接免疫熒光法定位檢測(cè)細(xì)胞中LXRα和NF-κB p65的蛋白表達(dá)。
　　3.應(yīng)用NF-κB抑制劑PDTC，采用MTT法檢測(cè)TO901317對(duì)PDTC應(yīng)用后的MCF-7細(xì)胞增殖的作用，western blot檢測(cè)細(xì)胞中LX

3、Rα、NF-κB p65和cyclinD1等蛋白表達(dá)的改變。
　　結(jié)果:
　　1.隨著TO901317處理濃度的增加或處理時(shí)間的延長(zhǎng)，TO901317對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用逐漸增強(qiáng)，且能抑制MCF-7細(xì)胞進(jìn)入S期，阻滯細(xì)胞于G1期。與此同時(shí)，MCF-7細(xì)胞中LXRα與LXRβ的蛋白表達(dá)均明顯增強(qiáng)，NF-κB p65的蛋白表達(dá)則明顯降低，IκBα蛋白表達(dá)的變化與NF-κB p65蛋白的趨勢(shì)互補(bǔ)，檢測(cè)到IκBα蛋白表達(dá)的

4、逐漸增強(qiáng)，可進(jìn)一步驗(yàn)證NF-κB p65表達(dá)被抑制的效應(yīng)。此外，TO901317還可明顯下調(diào)cyclinD1的蛋白表達(dá)。
　　2. LXRαsiRNA轉(zhuǎn)染的MCF-7細(xì)胞中LXRα的mRNA和蛋白表達(dá)均明顯下調(diào)。LXRαsiRNA可明顯延緩TO901317對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用以及細(xì)胞中LXRα表達(dá)的上調(diào)及NF-κB p65和cyclinD1表達(dá)的下調(diào)。
　　3. NF-κB抑制劑PDTC的應(yīng)用可增強(qiáng)TO901317