弱激光調(diào)控巨噬細胞極化在脊髓損傷修復中的作用.pdf

1、脊髓損傷是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的嚴重創(chuàng)傷，是尚未解決的醫(yī)學難題。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)脊髓損傷后早期激素沖擊治療并不能使患者遠期獲益，激素沖擊還帶來許多并發(fā)癥，因此目前激素沖擊不再被推薦作為常規(guī)治療方法。減壓內(nèi)固定手術能夠解除損傷后脊髓的外在壓迫，在臨床上也被廣泛應用，但在手術減壓的時機和遠期治療效果等方面目前還存在著很多爭議。因此對于脊髓損傷，目前缺乏有效的臨床治療手段，研究人員一直致力于開發(fā)脊髓損傷治療的新方法。
　　弱激光作為一種無創(chuàng)

2、性的治療方式，因其具有顯著的抑炎、鎮(zhèn)痛、促組織損傷修復的作用，近年來被廣泛應用于醫(yī)學美容、關節(jié)疾病等治療中。弱激光被證明能促進腦卒中、周圍神經(jīng)損傷、神經(jīng)退行性疾病的康復。810nm弱激光被證實能加速脊髓損傷動物的運動功能恢復，對脊髓損傷局部的免疫炎癥微環(huán)境具有顯著性調(diào)節(jié)作用，能顯著性下調(diào)iNOS、IL-6的表達水平，同時還具有促進神經(jīng)軸突再生的有益作用。但弱激光促進神經(jīng)功能恢復的具體機制并不明確。炎癥反應是繼發(fā)性脊髓損傷的重要組成部分，

3、外周血來源巨噬細胞和脊髓固有小膠質(zhì)細胞被認為是參與脊髓損傷后炎癥反應最為重要的細胞群。近期研究表明，巨噬細胞和小膠質(zhì)細胞的極化狀態(tài)對脊髓損傷修復至關重要。而巨噬細胞/小膠質(zhì)細胞極化受到脊髓損傷局部炎癥微環(huán)境的調(diào)控，既然弱激光具有顯著的免疫炎癥調(diào)節(jié)作用，那么弱激光能否調(diào)控脊髓損傷后巨噬細胞的極化呢？針對以上問題，進行如下兩部分的實驗研究。
　　實驗一：弱激光治療對大鼠急性脊髓損傷后巨噬細胞/小膠質(zhì)細胞極化的作用
　　目的：

4、r>　　研究弱激光治療對大鼠急性脊髓損傷后巨噬細胞/小膠質(zhì)細胞極化的作用
　　方法：
　　將48只大鼠隨機分配到單純脊髓損傷組和脊髓損傷聯(lián)合弱激光治療組。弱激光治療組應用810nm弱激光對大鼠脊髓損傷區(qū)進行經(jīng)皮照射，照射治療功率150mW，照射光斑大小0.3cm2，單次照射時長50min，每天照射1次，連續(xù)照射1天、3天、7天或14天。在損傷及照射后上述時間點，對兩組大鼠脊髓進行取材，通過免疫熒光染色形態(tài)學檢測和免疫印跡試驗

5、分子生物學檢測，對脊髓損傷后不同時間點的巨噬細胞/小膠質(zhì)細胞極化進行評價。應用酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測脊髓損傷區(qū)局部白細胞介素-4和白細胞介素-13的表達。
　　結(jié)果：
　　弱激光照射治療后3天和7天時可顯著降低活化的巨噬細胞/小膠質(zhì)細胞的數(shù)量，同時能顯著性下調(diào)脊髓損傷區(qū)M1型巨噬細胞及其標志物iNOS的表達；在照射治療后7天時能上調(diào)M2型巨噬細胞及其標志物Arg1的表達。和對照組相比，弱激光治療后3天，7天和14天均能使脊髓損

6、傷區(qū)IL-4的表達上調(diào)，同時在治療7天時使IL-13的表達上調(diào)。
　　結(jié)論：
　　本實驗應用的弱激光治療能調(diào)控脊髓損傷后巨噬細胞/小膠質(zhì)細胞的極化，使M1型巨噬細胞表達下調(diào)，同時上調(diào)M2型巨噬細胞的極化表達。這種調(diào)控作用可能和弱激光治療使脊髓損傷局部IL-4和IL-13的表達上調(diào)有關。
　　實驗二：弱激光治療對大鼠急性脊髓損傷修復的作用
　　目的：
　　研究弱激光治療對大鼠脊髓損傷區(qū)的大小、損傷旁區(qū)神經(jīng)元存

7、活及大鼠運動功能恢復的作用
　　方法：
　　將62只大鼠隨機分配到單純脊髓損傷組和脊髓損傷聯(lián)合弱激光治療組。弱激光治療組應用810nm弱激光對大鼠脊髓損傷區(qū)進行經(jīng)皮照射，照射治療功率150mW，照射光斑大小0.3cm2，單次照射時長50min，每天照射1次，連續(xù)照射1天，3天、7天或14天。在損傷及照射后上述時間點，運用BBB評分對大鼠后肢運動功能進行評價，在損傷后21天進行足印跡實驗分析；在損傷后3天，7天和14天時對兩組

8、大鼠脊髓進行取材，觀察脊髓損傷區(qū)大體外觀。脊髓切片后分別進行 HE染色對脊髓損傷區(qū)的長度進行測量，進行免疫熒光染色對損傷旁區(qū)神經(jīng)元存活數(shù)量進行計數(shù)，進行Nissl染色對損傷區(qū)面積進行測定。
　　結(jié)果：
　　弱激光治療后7天和14天時，能顯著提高脊髓損傷大鼠的BBB評分。在脊髓損傷后21天，足印跡實驗顯示弱激光治療組大鼠的步長較對照組增加，步寬縮小，旋轉(zhuǎn)角減小。HE染色顯示損傷后3天，7天和14天時，弱激光治療組大鼠脊髓損傷區(qū)