miR-155在氧化低密度脂蛋白介導(dǎo)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞自噬中的作用.pdf

1、目的：
　　探討 miR-155在氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）介導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）自噬中的作用。
　　方法：
　　1.采用濃度為100μg/mL的ox-LDL對(duì)HUVECs作用處理，分別在不同的時(shí)刻收集細(xì)胞，用電鏡觀察HUVECs內(nèi)的超微改變，同時(shí)采用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)LC3和p62的mRNA的表達(dá)及miR-155的表達(dá)，用Western blot技術(shù)測(cè)定LC3-II及p62的蛋白水平，初步觀

2、察ox-LDL對(duì)HUVECs自噬水平及miR-155水平的改變。2.將HUVECs分為正常對(duì)照組，ox-LDL組，ox-LDL+miR-155mimic組，ox-LDL+miR-155inhibior組及ox-LDL+miRNA negative control（NC）組五個(gè)試驗(yàn)組。其中正常對(duì)照組不加任何干擾，而 ox-LDL組，ox-LDL+miR-155mimic組，ox-LDL+miR-155inhibior組及ox-LDL+mi

3、RNA NC組則用ox-LDL（100μg/mL）進(jìn)行誘導(dǎo)刺激。用電鏡觀察各組細(xì)胞內(nèi)的自噬體的形狀和數(shù)量，用qRT-PCR方法測(cè)定LC3和p62的mRNA的水平，用Western blot技術(shù)檢測(cè)LC3-II及p62的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.我們用100μg/mL的ox-LDL處理HUVECs6小時(shí)、12小時(shí)后，電鏡結(jié)果顯示細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)較多的自噬體及自噬溶酶體，qRT-PCR技術(shù)顯示LC3mRNA表達(dá)上調(diào)，而 p6

4、2mRNA表達(dá)下調(diào)，western blot結(jié)果顯示 LC3-II/GAPDH的水平上升，而p62/GAPDH的水平下降。由于細(xì)胞內(nèi)LC3上調(diào)及p62下調(diào)在6小時(shí)的時(shí)候最明顯，因此，我們將6小時(shí)作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的作用時(shí)間點(diǎn)。此外，qRT-PCR結(jié)果顯示ox-LDL處理后的細(xì)胞內(nèi) miR-155的表達(dá)增加。2.用 miR-155mimic，miR-155inhibior及miR-155 NC對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，并用100μg/mL ox-LDL處