BMAL1對人卵巢顆粒細胞中雌激素合成的影響及其與PCOS相關性的研究.pdf

1、目的：多囊卵巢綜合征（polycystic ovarian syndrome，PCOS）是育齡期女性常見的內分泌和代謝紊亂性疾病之一，其內分泌及代謝系統(tǒng)的異常往往表現(xiàn)為損害女性生殖健康甚至造成不孕。此類患者其卵巢中卵泡刺激素（Follicle Stimulating Hormone，F(xiàn)SH）的作用受到阻滯，最終導致卵泡異常閉鎖，不排卵。BMAL1（Brain and muscle ARNT-like protein1）被認為在哺乳動物生

2、殖系統(tǒng)卵巢的卵泡發(fā)育和激素合成中起到重要作用，對于維持哺乳動物生殖功能有著重要的功能。SIRT1（Sirtuin1）在維持哺乳動物卵泡發(fā)育過程正常進行中起到重要作用，并通過與 BMAL1相互作用而呈現(xiàn)節(jié)律性表現(xiàn)。研究顯示，其在顆粒細胞等雌激素合成細胞中對芳香化酶的表達調控起到重要作用。然而，BMAL1在PCOS患者卵巢顆粒細胞中表達與正常人群是否存在差異，人的顆粒細胞中BMAL1是否參與同時如何調控雌激素合成，SIRT1在此過程中扮演著

3、什么樣的角色仍是不明確的。我們的實驗旨在研究 BMAL1是否與 PCOS的發(fā)生發(fā)展存在聯(lián)系，BMAL1是否并且如何在人顆粒細胞中對雌激素合成起到調控作用。
　　方法：⑴納入了2014年9月-2015年9月在仁濟醫(yī)院生殖中心 IVF/ICSI-ET予長方案促排卵，以 hCG為扳機方式的PCOS患者及非 PCOS患者各24例，檢測記錄了包括年齡、BMI、空腹血糖、hCG用量等臨床指標，收集其卵巢卵泡液樣本并進行顆粒細胞提取，通過 qR

4、T-PCR檢測兩組人群顆粒細胞中BMAL1 mRNA的水平。⑵利用人原代顆粒細胞及人卵巢顆粒細胞系KGN作為細胞模型，采用干擾RNA、過表達、添加抑制劑等實驗，通過免疫化學發(fā)光檢測細胞上清液雌激素合成，qRT-PCR以及Western Blot等實驗方法來對人卵巢顆粒細胞內BMAL1對芳香化酶表達及雌激素合成調節(jié)的具體機制進行進一步的實驗分析。
　　結果：①qRT-PCR結果顯示，PCOS患者的卵巢顆粒細胞中 BMAL1的mRNA

5、表達水平顯著低于非PCOS患者（p<0.05）。②在KGN細胞中敲低BMAL1后細胞雌激素合成減少，同時其芳香化酶、SIRT1表達水平降低，過表達 BMAL1后，細胞雌激素合成水平升高，芳香化酶及 SIRT1表達水平升高。在 KGN細胞中敲低 SIRT1后細胞雌激素合成減少，同時芳香化酶、BMAL1表達水平降低，過表達 SIRT1后，細胞雌激素合成水平升高，芳香化酶及BMAL1表達水平升高。BMAL1和SIRT1敲低后細胞 JNK磷酸化

6、水平降低，JNK過表達實驗后細胞雌激素合成水平升高，芳香化酶，BMAL1及 SIRT1表達水平均表現(xiàn)為升高。應用 JNK或 SIRT1抑制劑作用KGN細胞后，細胞雌激素合成降低，BMAL1、SIRT1和JNK表達水平下調；抑制劑作用于原代顆粒細胞后同樣表現(xiàn)為細胞雌激素合成降低，BMAL1、SIRT1和JNK表達水平下調。
　　結論：闡述了BMAL1在人卵巢顆粒細胞中對雌激素合成的作用，發(fā)現(xiàn)了 BMAL1-SIRT1這一正反饋環(huán)路在