菲牛蛭對(duì)載脂蛋白E基因敲除小鼠動(dòng)脈粥樣硬化的影響.pdf

1、目的：
　　本文選用ApoE基因敲除(apolipoprotein E gene knock out，ApoE-/-)小鼠作為研究對(duì)象。旨在討論菲牛蛭對(duì)ApoE-/-小鼠血脂水平以及動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)相關(guān)蛋白和基因的表達(dá)，以探討菲牛蛭抗動(dòng)脈粥樣硬化的可能機(jī)制。
　　方法：
　　本文選用15周齡雄性ApoE-/-小鼠高脂飼料喂養(yǎng)5周建立動(dòng)脈粥樣硬化的小鼠模型。后將ApoE-/-小鼠隨機(jī)分為模型組Mol(n=8)、為菲牛蛭

2、粉高劑量組HPH(200mg.kg-1.d-1，n=8)、菲牛蛭粉低劑量組HPL(75mg.kg-1.d-1，n=8)、辛伐他汀組Sim(3mg.kg-1.d-1，n=8)、菲牛蛭素高劑量組BDH(400U.kg-1.d-1，n=8)、菲牛蛭粉低劑量組BDL(200U.kg-1.d-1，n=8);C57BL/J6作為空白對(duì)照組Con(control group，n=8)，給藥時(shí)間為10周。10周后檢測(cè)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)如下:
　　1.測(cè)定各

3、組小鼠的血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的水平;
　　2.通過HE染色，觀察各組小鼠主動(dòng)脈根部粥樣硬化斑塊情況;
　　3.通過Masson染色，觀察各組小鼠主動(dòng)脈根部粥樣硬化斑塊內(nèi)膠原含量情況;
　　4.運(yùn)用免疫組化半定量法檢測(cè)各組小鼠主動(dòng)脈內(nèi)CD34、VEGF、VEGFR-2、HIF-1α的蛋白表達(dá)情況
　　5、運(yùn)用實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢

4、測(cè)各組小鼠主動(dòng)脈中的VEGF、HIF-1α和VEGFR-2mRNA表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　血脂水平結(jié)果顯示:與模型組相比，辛伐他汀組、菲牛蛭粉大劑量組、菲牛蛭粉小劑量組、菲牛蛭素大劑量組、菲牛蛭素小劑量組均能降低小鼠中TC、TG、LDL-C的水平（P＜0.05或者P＜0.01）。而與模型組相比，菲牛蛭粉大劑量組、菲牛蛭粉小劑量組、辛伐他汀組能升高HDL-C水平(P＜0.05或者P＜0.01)而菲牛蛭素大劑量組、菲牛蛭素小

5、劑量組能降低HDL-C水平(P＜0.05)。
　　(1)HE染色結(jié)果顯示管腔內(nèi)的病理結(jié)構(gòu)，模型組中出現(xiàn)血管壁增厚，出現(xiàn)大量壞死組織、泡沫細(xì)胞，形成斑塊。與模型組相比，各個(gè)治療組以上斑塊情況均有改善。
　　(2)Masson染色結(jié)果顯示:各組斑塊中膠原含量分別為21.5±2.44％（模型組）、51.7±2.47％（菲牛蛭素大劑量組）、45.9±4.12％（菲牛蛭素小劑量組）、37.7±3.33％（辛伐他汀組）、31.6±4.8

6、0％（菲牛蛭粉大劑量組）、26.0±2.10％（菲牛蛭粉小劑量組），與模型組比較各個(gè)治療組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)
　　(3)CD34免疫組化結(jié)果顯示:與正常對(duì)照組相比較，模型組與各個(gè)治療組中的CD34含量均高于對(duì)照組(P＜0.01);與模型組相比，各個(gè)治療組中的CD34含量均明顯減少（P＜0.05或者P＜0.01）.菲牛蛭粉大劑量組與菲牛蛭粉小劑量組間有顯著差異(P＜0.05)
　　(4) VEGF免疫組化結(jié)果顯示:

7、與正常對(duì)照組相比較，模型組與各個(gè)治療組中的VEGF含量均高于對(duì)照組(P＜0.01);與模型組相比，各個(gè)治療組中的VEGF含量均明顯減少（P＜0.05或者P＜0.01）;菲牛蛭素大劑量組和菲牛蛭素小劑量組之間有顯著差異(P＜0.05);菲牛蛭粉大劑量組、菲牛蛭粉小劑量組間有顯著差異(P＜0.05)
　　(5) VEGFR-2免疫組化結(jié)果顯示:與正常對(duì)照組相比較，模型組與各個(gè)治療組中的VEGF含量均高于對(duì)照組(P＜0.01);與模型組

8、相比，各個(gè)治療組中的VEGF含量均明顯減少(P＜0.01);
　　(6) HIF-1α免疫組化結(jié)果顯示:與正常對(duì)照組相比較，模型組與各個(gè)治療組中的HIF-1α含量均高于對(duì)照組(P＜0.01);與模型組相比，各個(gè)治療組中的HIF-1α含量均明顯減少(P＜0.01);菲牛蛭素大劑量組和菲牛蛭素小劑量組之間有顯著差異(P＜0.01);菲牛蛭粉大劑量組與菲牛蛭粉小劑量組之間無明顯差異(P＞0.05)
　　(7) RT-PCR結(jié)果顯示

9、，VEGF mRNA表達(dá)比較:與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠血管壁VEGF mRNA表達(dá)顯著升高(P＜0.01);與模型組相比，各藥物干預(yù)組血管壁VEGR mRNA表達(dá)均明顯下降(P＜0.01)
　　(8) RT-PCR結(jié)果顯示，VEGFR-2mRNA表達(dá)比較:與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠血管壁VEGFR-2mRNA表達(dá)顯著升高(P＜0.01);與模型組相比，各藥物組血管壁VEGFR-2mRNA表達(dá)均明顯下降(P＜0.01)

10、　　(9) HIF-1α mRNA表達(dá)比較:與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠血管壁HIF-1α mRNA表達(dá)顯著升高(P＜0.01);與模型組相比，各藥物組血管壁HIF-1α mRNA表達(dá)均明顯下降(P＜0.01);其中菲牛蛭素大劑量組下降最為顯著(P＜0.01);辛伐他汀組表達(dá)均低于菲牛蛭粉大劑量組和菲牛蛭粉小劑量組(P＜0.01)
　　結(jié)論：
　　1、菲牛蛭能夠降低ApoE-/-小鼠的血脂水平。
　　2、菲牛蛭能抑制動(dòng)