VEGF-B促進(jìn)糖尿病小鼠角膜神經(jīng)再生的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　通過 I型糖尿病小鼠模型和體外三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞模型，研究血管內(nèi)皮生長因子 B（VEGF-B）對糖尿病小鼠角膜上皮和神經(jīng)再生的作用，并探討其機(jī)制。
　　方法：
　　選取鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)的I型糖尿病小鼠與同齡對照小鼠，建立角膜上皮損傷再生模型。Western blot和免疫組化檢測正常和糖尿病小鼠角膜上皮內(nèi)源性VEGF-B表達(dá)量差異；熒光素鈉染色檢測外源性VEGF-B對糖尿病小鼠角膜上皮損傷愈合速率的影響

2、；角膜整體鋪片染色檢測VEGF-B對糖尿病小鼠角膜神經(jīng)再生的作用。體外培養(yǎng)小鼠原代三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，加入中和抗體以及小分子抑制劑，免疫熒光檢測VEGF-B對三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突生長、線粒體氧化應(yīng)激狀態(tài)的影響；Western blot檢測VEGF-B對三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞內(nèi)信號通路的活化情況。
　　結(jié)果：
　　（1）與同齡對照相比，隨著糖尿病小鼠病程的延長，糖尿病小鼠體重顯著減輕，血糖水平顯著升高，且小鼠角膜敏感度顯著降低。角膜神經(jīng)染色

3、顯示糖尿病小鼠的角膜上皮末梢神經(jīng)纖維密度顯著減少，且基底膜神經(jīng)顯微結(jié)構(gòu)顯著改變。正常小鼠再生角膜上皮中的 VEGF-B表達(dá)水平較正常角膜上皮顯著增強(qiáng)，而在糖尿病小鼠再生角膜上皮中，VEGF-B的表達(dá)未見顯著提高。（2）外源性添加 VEGF-B可顯著促進(jìn)正常及糖尿病小鼠角膜神經(jīng)、上皮再生和角膜敏感度恢復(fù)。（3）糖尿病導(dǎo)致三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞內(nèi)ROS水平顯著升高，線粒體處于氧化應(yīng)激狀態(tài)。VEGF-B可以顯著降低三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞內(nèi)ROS水平，顯著降低

4、其線粒體應(yīng)激水平，封閉 VEGFR-1而非 NRP-1，可以完全抵消VEGF-B對糖尿病三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞線粒體應(yīng)激水平的恢復(fù)。（4）VEGF-B可顯著促進(jìn)正常及糖尿病小鼠三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突的生長以及下游Akt、GSK3β和S6K磷酸化水平升高。封閉VEGFR-1而非NRP-1，可完全抵消VEGF-B的促進(jìn)功能。加入Akt、GSK3β、mTOR的抑制劑，可完全阻斷VEGF-B的促神經(jīng)生長作用。
　　結(jié)論：
　　（1）隨著病程延長