降膽固醇功能乳桿菌的篩選及降解機理研究.pdf

1、膽固醇攝入過量帶來的高脂血癥、冠心病、動脈硬化等心血管疾病已經(jīng)嚴重危害到人體健康，如何減少膽固醇攝入量、降低人體血清膽固醇水平的研究越來越受到廣泛關(guān)注。國外已有大量關(guān)于乳酸菌降膽固醇作用的文獻報道，但具體的篩選指標、去除機理等尚不明確，本研究旨在分離出來源于健康人體腸道的乳桿菌菌株，通過耐膽鹽能力、生長能力、體外降膽固醇量、去結(jié)合膽鹽能力等一系列指標評價乳桿菌菌株的降膽固醇綜合性能，篩選出具有很好的降膽固醇性能的潛力菌株用于益生菌制劑的

2、開發(fā)應(yīng)用，同時通過引入膽酸－膽固醇共沉淀曲線、有無添加膽汁鹽時菌株體外去除膽固醇量比較等方法探討乳桿菌降膽固醇作用的機理，為優(yōu)良菌株的篩選提供理論指導(dǎo)。 首先通過選擇性培養(yǎng)基平板涂布法篩選得到若干乳桿菌，經(jīng)革蘭氏染色選出陽性且形態(tài)特征符合乳桿菌的菌株。用乳桿菌特異引物將分離得到的細菌總DNA進行PCR擴增，得到500bp左右乳桿菌特異片段，將產(chǎn)物進行測序，通過序列比對鑒定到種，用于進一步實驗。 對6個種共14株乳桿菌的膽

3、鹽耐受性評價表明，有11株對2.8mM甘膽酸鈉和1.2mM?；悄懰徕c混合膽汁鹽耐受性很好，遲滯期小于2.00h，4株在6mM?；悄懰徕c膽汁鹽中遲滯期小于2.00h，且?guī)缀鯉缀跛芯陮Ω誓懰徕c的耐受性比都對?；悄懰徕c更強。 菌株體外降膽固醇能力研究發(fā)現(xiàn)，有7株菌在添加2.8mM甘膽酸鈉和1.2mM牛磺膽酸鈉混合膽汁鹽的培養(yǎng)基中對膽固醇的去除量在20.00μg/ml以上，其中6株在6mM牛磺膽酸鈉中的去除量也高于20.00μg/m

4、l。且研究表明，降膽固醇能力具有明顯的菌株間差異。 菌株去結(jié)合膽鹽能力評價結(jié)果發(fā)現(xiàn)，去結(jié)合膽鹽能力同樣有明顯的菌株間差異。其中有4株的產(chǎn)膽酸量較高，在3.50-5.00μmol/ml之間。綜合三個篩選指標發(fā)現(xiàn)，四株植物乳桿菌LS12， Lp501， Lp529和LS31作為降膽固醇益生菌制劑潛力菌株性能較好，可作為起始菌株進一步優(yōu)化和研究。 對乳桿菌降膽固醇機理的研究發(fā)現(xiàn)，菌株體外降膽固醇是共沉淀與同化作用共同發(fā)生的結(jié)果