大麻素2(CB2)受體在調(diào)控Aβ1-42誘導(dǎo)的神經(jīng)肝細(xì)胞老化中的作用.pdf

1、大麻素（CB)受體是神經(jīng)干細(xì)胞維持增殖能力的過(guò)程中不可缺少的一部分，不斷受到研究者的重視。免疫組化實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)C B1和 CB2受體都存在于細(xì)胞表面。為了進(jìn)一步確定CB1與 CB2受體在細(xì)胞老化過(guò)程中的作用進(jìn)行了本課題的研究。首先，本課題實(shí)驗(yàn)人員在前期的探索中發(fā)現(xiàn)在APP-PS1小鼠生長(zhǎng)過(guò)程中，其腦內(nèi)的P-淀粉樣斑塊沉積隨著年齡增長(zhǎng)不斷增加，通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)基因小鼠腦切片進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)，可以看出，在 P-淀粉樣斑塊的數(shù)量與Nestin染色的活性細(xì)

2、胞數(shù)量之間存在負(fù)相關(guān)。利用P-半乳糖苷酶老化染色實(shí)驗(yàn)的方法對(duì)小鼠腦切片進(jìn)行處理，我們發(fā)現(xiàn)，腦部衰老的組織包裹在卩-淀粉樣沉積周圍，提示P-淀粉樣沉積蛋白可能引起組織細(xì)胞老化。于是在實(shí)驗(yàn)中選擇使用AP1.42建立細(xì)胞老化模型。AP1.42連續(xù)孵育神經(jīng)干細(xì)胞6天，可以提高神經(jīng)干細(xì)胞的活力，而連續(xù)孵育12天時(shí)，對(duì)細(xì)胞活力產(chǎn)生了明顯抑制作用。細(xì)胞水平的卩-半乳糖苷酶染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，A P1.42孵育神經(jīng)干細(xì)胞9天后，老化細(xì)胞的數(shù)量有顯著增加。

3、Western blot顯示細(xì)胞中老化初期分子p16和 R b蛋白的表達(dá)量劑量依賴性上升， 也進(jìn)一步提示AP1.42能夠在體外模擬A D小鼠腦內(nèi)的神經(jīng)干細(xì)胞老化情況。合成的NsTyr化合物是內(nèi)源性大麻素相似物，前期研究表明其具有神經(jīng)保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，NsTyr可以顯著抑制ApW2誘導(dǎo)的細(xì)胞老化及細(xì)胞內(nèi)p16和R b蛋白的表達(dá)。而在分別加入CB1和 CB2受體的阻斷劑后，C B2受體的阻斷劑可逆轉(zhuǎn)NsTyr拮抗A P造成的神經(jīng)

4、干細(xì)胞老化作用，提示，NsTyr通過(guò)C B2受體發(fā)揮抗老化效應(yīng)。細(xì)胞自噬功能也是對(duì)于細(xì)胞老化具有重要作用的環(huán)節(jié)，同時(shí)也受到大麻素受體的影響，為了進(jìn)一步確定NsTyr的作用機(jī)制，我們研究了其對(duì)細(xì)胞自噬水平的影響。AP連續(xù)9天孵育后對(duì)于細(xì)胞的自噬功能出現(xiàn)明顯的下降，NsTyr可以恢復(fù)細(xì)胞的自噬水平，提示NsTyr可以通過(guò)影響細(xì)胞自噬來(lái)減少老化細(xì)胞。
　　CB2受體的激動(dòng)劑JWH133與NsTyr具有相同的作用結(jié)果，都促進(jìn)了細(xì)胞自噬，減