西青果總酚酸提取工藝及抗創(chuàng)面感染研究.pdf

1、目的:本文以藏藥西青果為主要研究對象，通過響應(yīng)曲面法對西青果總酚酸的提取工藝進行考察;利用大孔樹脂以及硅膠柱層析等方法分離活性化合物;分別以沒食子酸和鞣花酸為對照品，運用色譜法對西青果進行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究;并對西青果總酚酸以及分離得到的化合物進行抗菌活性研究，并初步探討其作用機制，從而為開發(fā)西青果藥材奠定理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.以總酚酸的綜合評分為指標(biāo)，對總酚酸的提取工藝進行考察，并利用響應(yīng)曲面法(RSM)預(yù)測最優(yōu)提取方

2、法。
　　2.通過大孔樹脂以及硅膠柱層析等方法分離活性化合物，并利用理化性質(zhì)和波譜方法鑒定了3個化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
　　3.以沒食子酸以及鞣花酸分別為對照品，采用高效液相色譜法(HPLC)，測定西青果藥材中沒食子酸以及鞣花酸的含量，從而對西青果進行質(zhì)量控制。
　　4.選擇臨床分離的革蘭氏陽性菌（金黃色葡萄球菌）和革蘭氏陰性菌（產(chǎn)氣腸桿菌、大腸桿菌、肺炎克雷伯菌、嗜麥芽窄食單胞菌、銅綠假單胞菌、糞腸球菌）為研究對象，對西

3、青果總酚酸以及分離得到的單體化合物進行體外抗菌實驗，并通過電鏡和結(jié)晶紫染色法初步探討抗菌機制。
　　結(jié)果:
　　1.最優(yōu)提取工藝為回流提取3.39h，溶劑用量為24.67倍，溶劑濃度為74.66％。結(jié)合實際情況將提取條件改為回流提取3h，溶劑用量25倍，溶劑濃度為75％，綜合評分為73.71。
　　2.分離得到5個化合物，鑒定了其中的3個，分別為沒食子酸、鞣花酸以及阿江欖仁素。
　　3.經(jīng)HPLC測定，沒食子酸的

4、含量為1.74％。鞣花酸含量為0.58％。
　　4.阿江欖仁素比其他兩種化合物的抗菌作用顯著，其中對金黃色葡萄球菌以及糞腸球菌的抑制作用最為明顯。同時隨著化合物濃度的增高，生物膜的數(shù)量也隨之減少;生物膜熒光染色結(jié)果表明，阿江欖仁素不僅能夠減少生物膜中的活菌數(shù)量而且死菌數(shù)量也有所減少。
　　結(jié)論:
　　1.利用響應(yīng)曲面法對西青果總酚酸的提取工藝進行考察，與傳統(tǒng)工藝相比，結(jié)果更精確，準(zhǔn)確度更高。
　　2.利用高效液相