脊髓背根神經(jīng)節(jié)C-EBPβ在神經(jīng)病理性疼痛中調(diào)控作用的研究.pdf

1、研究背景：
　　神經(jīng)病理性疼痛的治療是一項(xiàng)世界性難題。傳統(tǒng)的藥物治療僅能緩解部分癥狀，且長(zhǎng)期使用可能出現(xiàn)嚴(yán)重的副作用。有關(guān)神經(jīng)病理性疼痛機(jī)制的研究對(duì)于新的治療方案的提出有重要意義。表觀遺傳調(diào)控在神經(jīng)病理性疼痛中的作用越來越明顯。組蛋白的修飾作為表觀遺傳學(xué)的重要組成部分，參與神經(jīng)病理性疼痛的調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn)組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶G9a通過調(diào)控μ阿片受體（Muopioidreceptor,MOR）和鉀離子通道Kv1.2在神經(jīng)病理性疼痛中發(fā)揮關(guān)

2、鍵作用。轉(zhuǎn)錄因子CCAAT/enhancerbindingprotein(C/EBP)β可以激活G9a基因表達(dá)參與脂質(zhì)的形成。但在神經(jīng)系統(tǒng)中C/EBPβ是否參與G9a的調(diào)控以及C/EBPβ在神經(jīng)病理性疼痛中具體作用，目前還不清楚。
　　研究目的：
　　探討C/EBPβ是否參與神經(jīng)病理性疼痛的調(diào)控及其作用機(jī)制。
　　研究方法：
　　1.通過坐骨神經(jīng)慢性壓迫性損傷（Chronicconstructioninjury，

3、CCI）手術(shù)制作神經(jīng)病理性疼痛的動(dòng)物模型，觀察神經(jīng)病理性疼痛中C/EBPβ表達(dá)情況。
　　2.通過siRNA基因沉默和脊髓背根神經(jīng)節(jié)（Dorsalrootganglia，DRG）顯微注射方法下調(diào)C/EBPβ的表達(dá)，觀察動(dòng)物機(jī)械縮足閾值、熱縮足潛伏期、冷縮足潛伏期以及運(yùn)動(dòng)功能的變化。
　　3.通過AAV載體和DRG顯微注射技術(shù)上調(diào)C/EBPβ的表達(dá)，觀察動(dòng)物機(jī)械縮足閾值、熱縮足潛伏期、冷縮足潛伏期和運(yùn)動(dòng)功能的變化以及是否產(chǎn)生條

4、件位置偏愛現(xiàn)象。
　　4.利用RT-PCR和WesternBlot方法，檢測(cè)抑制或過表達(dá)C/EBPβ后DRG內(nèi)G9a、MOR和Kv1.2的mRNA和蛋白含量的變化；通過免疫組織化學(xué)和單細(xì)胞RT-PCR技術(shù)檢測(cè)C/EBPβ與G9a、MOR和Kv1.2的共表達(dá)情況；通過染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)檢驗(yàn)DRG內(nèi)C/EBPβ與G9a的直接作用；采用基因敲除、細(xì)胞培養(yǎng)等技術(shù)探討G9a在C/EBPβ調(diào)控通路中的作用。
　　結(jié)果：
　　1.

5、CCI引起外周神經(jīng)損傷后，受損DRG內(nèi)C/EBPβ的表達(dá)在術(shù)后3天即升高，一直持續(xù)至術(shù)后14天。
　　2.DRG內(nèi)預(yù)先注射C/EBPβsiRNA能夠阻止CCI誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生神經(jīng)病理性疼痛的癥狀。CCI術(shù)后采用siRNA的方法降低C/EBPβ的表達(dá)能夠緩解動(dòng)物神經(jīng)損傷引起的痛敏癥狀。
　　3.DRG內(nèi)升高C/EBPβ的表達(dá)能夠誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生對(duì)機(jī)械刺激和溫度刺激的痛覺過敏以及自發(fā)性疼痛的癥狀。
　　4.無論siRNA基因沉默、

6、AAV載體過表達(dá)還是DRG顯微注射技術(shù)均不影響動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)功能。
　　5.CCI能夠引起受損DRG內(nèi)C/EBPβ和G9a的蛋白與mRNA含量升高，MOR和Kv1.2的蛋白與mRNA水平下降。抑制C/EBPβ的表達(dá)能夠下調(diào)CCI引起的G9a的高表達(dá)同時(shí)升高M(jìn)OR和Kv1.2的表達(dá)。模擬神經(jīng)病理性疼痛中DRG內(nèi)C/EBPβ的高表達(dá)能夠上調(diào)DRG內(nèi)G9a的表達(dá)并降低MOR和Kv1.2的蛋白和mRNA水平。
　　6.神經(jīng)損傷能夠促使受