姜黃素化合物對(duì)急性高脂血癥大鼠肝臟脂代謝的影響及其作用機(jī)制.pdf

1、目的：隨著人們生活方式及飲食結(jié)構(gòu)的顯著改變，高脂血癥（Hyperglipemia，HLP）已經(jīng)成為我國(guó)重要的公共健康問題。調(diào)查顯示，目前我國(guó)18歲及以上成人的血脂異?；疾÷室迅哌_(dá)18.6％，其中高甘油三脂血癥患病率11.9%，明顯高于膽固醇血癥患病率2.9%及低高密度脂蛋白血癥7.4%等類型[1]。眾所周知，肝臟是人體脂肪代謝的重要器官，涉及脂肪的合成、分解、轉(zhuǎn)運(yùn)等過(guò)程。而肝臟的脂代謝失衡，將會(huì)逐漸引起脂肪在肝臟的大量聚集并沉積，最終導(dǎo)

2、致出現(xiàn)非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD），NAFLD與糖尿病和肥胖關(guān)系密切，近二十年間，NAFLD的患病率增加了一倍，成為西方國(guó)家頭號(hào)肝病[2]。NAFLD包括非酒精性單純性脂肪肝（ nonalcoholic fatty liver， NAFL）、非酒精性脂肪性肝炎（nonalcoholicsteatohepatitis，NASH）甚至肝硬化和肝細(xì)胞癌（ hepatocel

3、lular carcinoma，HCC）。肝臟脂質(zhì)代謝過(guò)程非常復(fù)雜，而脂肪酸的β氧化是脂肪分解的重要形式。肉毒堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶（camitine palmitoyltransferase，CTP-1A）是脂肪酸β氧化過(guò)程中的重要限速酶，CTP-1A的水平變化與高脂血癥的發(fā)生關(guān)系密切。過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體-α（peroxisome proliferativeactivated receptor-α， PPAR-α）是脂肪酸氧化過(guò)程中

4、的上游轉(zhuǎn)錄因子,CTP-1A是其下游的關(guān)鍵靶基因，CTP-1A的表達(dá)變化受PPAR-α的調(diào)控[3]。PPAR-α/CTP-1A通路是肝臟脂代謝的重要通路。姜黃素是我們從植物姜黃的根莖中提取出的一種天然多酚類物質(zhì)，具有降血脂、改善脂代謝、抗氧化、抗炎鎮(zhèn)痛、抗腫瘤等多種作用。降脂通絡(luò)軟膠囊（神威藥業(yè)）是以姜黃素化合物為主要原料制成的軟膠囊，是臨床應(yīng)用的一種降脂中成藥，但其降低血脂的具體機(jī)制是否與肝臟PPAR-α/CTP-1A通路有關(guān)，目前尚

5、不清楚。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)蛋黃乳劑法建立大鼠急性高脂血癥模型，觀察急性高脂狀態(tài)下SD大鼠肝臟脂肪沉積情況、脂代謝相關(guān)酶類的變化，明確姜黃素化合物是否可以通過(guò)PPAR-α/CPT-1A信號(hào)途徑促進(jìn)脂肪氧化從而改善肝臟脂代謝，探討其降脂機(jī)制和可能的肝臟保護(hù)作用，為臨床提供理論依據(jù)并指導(dǎo)臨床用藥。
　　方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)對(duì)象及分組：健康雄性SD大鼠48只（月齡5-6周，體質(zhì)量180±20g），隨機(jī)分為正常對(duì)照組、高脂模型組、姜黃素化合物

6、低劑量組(姜黃素化合物溶液125mg/kg.d)、姜黃素化合物中劑量組(姜黃素化合物溶液250mg/kg.d)、姜黃素化合物高劑量組（姜黃素化合物溶液500mg/kg.d）、非諾貝特組（非諾貝特30mg/kg.d）6組。正常對(duì)照組、高脂模型組給予西王玉米油(2.5ml/kg.d)灌胃，實(shí)驗(yàn)組分別給予相應(yīng)上述藥物灌胃，均于每日同一時(shí)間進(jìn)行灌胃1次，共干預(yù)10天。
　　2.急性高脂血癥大鼠模型的制備：第10天灌胃1小時(shí)后，分別給予高脂

7、模型組、實(shí)驗(yàn)組大鼠一次性腹腔注射75%新鮮蛋黃乳液25ml/kg制備急性高脂模型；給予正常對(duì)照組大鼠生理鹽水25ml/kg腹腔注射。
　　3.標(biāo)本制備及檢測(cè)指標(biāo)：腹腔注射24小時(shí)后斷尾取血(取血前10小時(shí)禁食水)，全自動(dòng)化學(xué)分析法測(cè)定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、甘油三酯（TG）、膽固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C），采用試劑盒檢測(cè)SD大鼠血清及其肝臟游離脂肪酸（FFA）、肝臟T

8、G的含量。取血后給予4%水合氯醛(10ml/kg)腹腔注射麻醉大鼠，無(wú)菌環(huán)境下開腹取出肝臟，部分肝組織用于冰凍切片，進(jìn)行HE染色及油紅O染色觀察其肝臟結(jié)構(gòu)變化及脂肪變程度；剩余部分肝組織立即液氮速凍，-80℃冰箱保存用于測(cè)定PPAR-α、CPT-1A mRNA及蛋白含量。
　　4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料結(jié)果使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(?x±s)來(lái)表示，各組間比較采用單因素方差分析。多重比較則應(yīng)

9、用LSD、SNK-q檢驗(yàn)分析。P<0.05則認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.證實(shí)急性高脂模型成立：腹腔注射蛋黃乳液6小時(shí)后血TG（9.66±10.98mmol/L），TC（8.72±2.17mmol/L）, LDL-C（0.78±0.57mmol/L）水平開始升高。至24小時(shí) TG（20.97±15.85mmol/L）， TC（10.34±4.24mmol/L）, LDL-C（0.58±0.25mmol/L）達(dá)

10、高峰， HDL-C（2.49±0.88mmol/L）較前降低，與0h時(shí)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），證實(shí)SD大鼠急性高脂血癥模型造模成功；
　　2.各組大鼠血脂、血清游離脂肪酸水平比較：急性高脂模型組大鼠血脂及血清FFA的水平均明顯高于正常對(duì)照組（P＜0.01）；與急性高脂模型組比較，姜黃素化合物各劑量組及非諾貝特組均可顯著降低大鼠血清TG、TC、LDL-C以及FFA水平（P＜0.05），且升高血HDL-C水平（P＜0.

11、05），各組中尤以姜黃素高劑量組作用最為明顯；非諾貝特組及姜黃素中劑量組降低血脂及FFA作用次之，但非諾貝特組和姜黃素中劑量組之間比較差異不明顯（P＞0.05）;
　　3.各組大鼠肝臟甘油三酯、游離脂肪酸含量比較：急性高脂模型組大鼠肝臟TG、FFA含量明顯高于正常對(duì)照組（P＜0.01）；姜黃素化合物各劑量組能夠明顯降低大鼠肝臟TG、FFA含量（P＜0.05），且上述作用具有顯著的藥物劑量依賴性；非諾貝特組也可明顯降低大鼠肝臟TG、

12、FFA的含量（P＜0.05），但與姜黃素中劑量組間比較差異不明顯（P＞0.05）；4各組大鼠肝功水平比較：各組大鼠血ALT、AST水平均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；
　　5.各組大鼠肝臟組織光鏡結(jié)果比較：
　　5.1. HE染色：正常對(duì)照組大鼠肝臟細(xì)胞的結(jié)構(gòu)清晰完整，排列整齊一致，胞漿呈均勻紅染；急性高脂模型組肝細(xì)胞腫脹顯著、透明變性，結(jié)構(gòu)紊亂，局部細(xì)胞溶解，其內(nèi)可見大小不等、數(shù)量不一的小空泡；姜黃素化合物低、中、高劑量組

13、隨藥物劑量的增加，肝細(xì)胞腫脹程度較模型組逐漸減輕，細(xì)胞排列較整齊，胞內(nèi)空泡數(shù)量逐漸減少，其中高劑量組改變最為顯著，僅可見肝細(xì)胞輕度水腫，細(xì)胞排列整齊；非諾貝特組肝細(xì)胞輕度水樣變，結(jié)構(gòu)稍紊亂;
　　5.2.油紅O染色：正常對(duì)照組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，胞漿淡藍(lán)色，未見紅色脂滴；急性高脂模型組肝細(xì)胞內(nèi)可見少量微小的紅色類圓形脂滴，未見明顯的脂質(zhì)聚集、沉積；各藥物干預(yù)組肝細(xì)胞內(nèi)的紅色脂滴均有不同程度地減少，且此作用呈藥物劑量依賴性，其中姜黃素化

14、合物高劑量組改變最顯著，細(xì)胞內(nèi)未見脂滴存在；
　　6.姜黃素化合物對(duì)脂代謝通路中脂酸β氧化關(guān)鍵酶CPT-1A的影響：
　　6.1.各組大鼠肝臟CPT-1A mRNA表達(dá)水平的比較：急性高脂模型組大鼠肝臟中CPT-1A mRNA的表達(dá)水平較正常對(duì)照組顯著下降（P＜0.01）；姜黃素化合物低、中、高劑量組CPT-1A mRNA表達(dá)水平較急性高脂模型組均顯著升高（P＜0.01），且具有劑量依賴性；非諾貝特組CPT-1A mRNA表

15、達(dá)水平較急性高脂模型組亦升高（P＜0.01），但與姜黃素中劑量組間差異不明顯（P＞0.05）;
　　6.2.各組大鼠肝臟CPT-1A的蛋白表達(dá)水平比較：急性高脂模型組大鼠肝臟中CPT-1A蛋白表達(dá)量較正常對(duì)照組顯著下降（P＜0.01）；姜黃素化合物低、中、高劑量組CPT-1A蛋白表達(dá)量較急性高脂模型組均顯著升高（P＜0.01），且具有劑量依賴性；非諾貝特組CPT-1A蛋白表達(dá)量較急性高脂模型組亦升高（P＜0.01），但與姜黃素中劑

16、量組間差異不明顯（P＞0.05）；
　　7.姜黃素化合物對(duì)PPAR-α的影響：急性高脂模型組大鼠肝臟中PPAR-αmRNA和蛋白的表達(dá)水平較正常對(duì)照組顯著下降（P＜0.01）；姜黃素化合物低、中、高劑量組PPAR-αmRNA和蛋白表達(dá)水平較急性高脂模型組均顯著升高（P＜0.01），且具有劑量依賴性；非諾貝特組PPAR-αmRNA和蛋白表達(dá)水平較急性高脂模型組亦升高（P＜0.01），但與姜黃素中劑量組間差異不明顯（P＞0.05）。<

17、br>　　結(jié)論：
　　1.一次性腹腔注射75%蛋黃乳液成功制備大鼠急性高脂血癥模型，表現(xiàn)為注射24h后血TG、TC、LDL-C水平達(dá)高峰，血FFA升高，并且肝臟結(jié)構(gòu)開始紊亂，可見輕度脂質(zhì)沉積，但轉(zhuǎn)氨酶水平較正常組無(wú)明顯差異。
　　2.姜黃素化合物低、中、高劑量組和非諾貝特組可不同程度地改善急性高脂大鼠的血脂異常，并且降低血清FFA及肝臟FFA、TG的水平，減輕肝細(xì)胞損傷程度及脂肪沉積，且姜黃素高劑量組作用最為顯著。