蛋白磷酸酶PPM1A調(diào)控胞質(zhì)RNA檢測通路的功能與機(jī)制研究.pdf

1、由胞質(zhì)核酸檢測通路起始的抗病毒固有免疫應(yīng)答是宿主細(xì)胞防御RNA/DNA病毒入侵的主要機(jī)制之一。當(dāng)病毒入侵宿主細(xì)胞后，通過逐次激活胞質(zhì)內(nèi)的核酸感知受體，膜偶聯(lián)的結(jié)頭蛋白MAVS/STING，蛋白激酶TBK1/IKKε，及信號中介蛋白轉(zhuǎn)錄因子IRF3，宿主細(xì)胞能快速響應(yīng)病毒侵入，生成多種Ⅰ型與Ⅲ型干擾素，及數(shù)百干擾素誘導(dǎo)產(chǎn)物，建立抗病毒狀態(tài)抑制病毒入侵。但目前關(guān)于胞質(zhì)核酸檢測途徑的磷酸化與去磷酸化調(diào)控以及細(xì)胞如何保持抗病毒應(yīng)答的靜息狀態(tài)還所

2、知甚少。
　　通過蛋白磷酸酶組學(xué)篩選，發(fā)現(xiàn)金屬依賴的蛋白磷酸酶PPM1A，依賴于其絲蘇氨酸磷酸酶活性，能夠強(qiáng)烈抑制RIG-Ⅰ受體起始的抗病毒固有免疫應(yīng)答和宿主細(xì)胞與個(gè)體的抗病毒能力。同時(shí)，在Cas9介導(dǎo)的PPM1A敲除的表皮細(xì)胞和Ppm1a-/-的巨噬細(xì)胞中，細(xì)胞對病毒的固有免疫應(yīng)答和防御顯著增強(qiáng)。而且PPM1A基因敲除小鼠的抗病毒能力能顯著增強(qiáng);而PPM1A的轉(zhuǎn)基因斑馬魚的抗病毒能力顯著減弱。在分子機(jī)制上，通過質(zhì)譜分析、免疫共沉

3、淀及免疫熒光，發(fā)現(xiàn)PPM1A與TBK1/IKKε形成內(nèi)源復(fù)合物，并且PPM1A能直接將處于激活狀態(tài)的MAVS和TBK1/IKKε去磷酸化，關(guān)閉信號復(fù)合體的形成，終止抗病毒信號。相反，活化的MAVS也能干擾PPM1A與TBK1/IKKε復(fù)合物的形成，抵消PPM1A對抗病毒信號的抑制作用。綜上所述，研究發(fā)現(xiàn)磷酸酶PPM1A是RIG-Ⅰ介導(dǎo)的抗病毒固有免疫應(yīng)答的生理調(diào)節(jié)因子，并鑒定其是作用于MAVS的首個(gè)磷酸酶。本研究促進(jìn)了對胞質(zhì)抗病毒通路的