尼克酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶在膿毒癥小鼠免疫抑制中的作用.pdf

1、膿毒癥在嚴(yán)重創(chuàng)傷、感染和大手術(shù)病人中非常常見(jiàn)，治療困難，死亡率高。免疫抑制和繼發(fā)感染是目前膿毒癥患者主要死亡原因，其發(fā)生機(jī)制尚不清楚，缺乏有效治療措施。尼克酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（NAMPT）是一種多功能分子，它是一種促炎細(xì)胞因子，同時(shí)具有酶活性，是NAD補(bǔ)救生物合成的限速酶，調(diào)節(jié)多種細(xì)胞的能量代謝、分化與死亡等生命活動(dòng)。已有研究顯示，NAMPT可促進(jìn)膿毒癥炎癥反應(yīng)和器官功能損害，但它在膿毒癥免疫抑制發(fā)生中的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　目的

2、：（1）探討NAMPT在膿毒癥免疫抑制發(fā)生中的作用；（2）了解NAMPT抑制劑FK866對(duì)膿毒癥小鼠死亡率和T細(xì)胞免疫反應(yīng)的影響。
　　方法：（1）建立CLP（盲腸結(jié)扎穿孔）膿毒癥模型。（2）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組：A：實(shí)驗(yàn)組：NAMPT抑制劑FK866治療組；B：對(duì)照組：CLP+FK866溶媒組；C：假手術(shù)組。（3）CLP小鼠生存率監(jiān)測(cè)：各組動(dòng)物（n=13~15）在手術(shù)后觀察10天，記錄小鼠生存情況。（4）ELISA檢測(cè)各小鼠血清細(xì)胞因子

3、水平。（5）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠CD4+T細(xì)胞增殖能力和凋亡。（6）遲發(fā)型超敏反應(yīng)（delayed-type hypersensitivity，DTH）在整體水平檢測(cè)小鼠T細(xì)胞功能。（7）免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)小鼠脾臟及肝臟一氧化氮合成酶（ iNOS）水平。（8）流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)MDSC及Treg細(xì)胞比例。
　　結(jié)果：（1）NAMPT抑制劑 FK866可顯著提高嚴(yán)重膿毒癥小鼠鼠的生存率（ p<0.05）。（2）同時(shí)，F(xiàn)K866

4、可顯著降低小鼠血循環(huán)中細(xì)菌數(shù)量，提示FK866可提高CLP小鼠對(duì)感染的抵抗力。（3）CLP后1d和3d，F(xiàn)K866治療組小鼠血清中細(xì)胞因子水平均較 CLP組為低。CLP后7d，F(xiàn)K866治療組小鼠血清TNF-α和TGF-β仍較CLP組低（p<0.05），但I(xiàn)FN-γ、IL-6、IL-10和 PGE2兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。（4）FK866治療組 CLP小鼠 CD4+T細(xì)胞增殖較對(duì)照組（CLP+vehicle組）顯著增加（

5、p<0.05），凋亡則顯著減少（p<0.05）。（5）DTH實(shí)驗(yàn)顯示，F(xiàn)K866治療組小鼠T細(xì)胞功能較對(duì)照組顯著提高（p<0.05）。（6）免疫組化檢測(cè)顯示，F(xiàn)K866治療組 CLP小鼠較對(duì)照組（CLP+vehicle組）肝臟和脾臟組織中 iNOS表達(dá)均顯著下調(diào)。（7）CLP后3d和7d，F(xiàn)K866治療組小鼠脾臟、骨髓和外周血中MDSC比例均較對(duì)照組（CLP+vehicle）顯著降低。但在CLP后1d，兩組差異無(wú)顯著意義（p>0.05）