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文檔簡介
1、目的:順鉑(順氯氨鉑Ⅱ,amminedichloroplatinumⅡ,CDDP)是目前一線化療藥物中最有效的藥物之一,廣泛應用于多種惡性腫瘤,尤其是宮頸癌(CervicalCancer,CC)的治療。但我們發(fā)現(xiàn)在治療過程中癌細胞會逐漸對順鉑產(chǎn)生不同程度的耐藥,后期的化療效果差強人意。本研究的目的是分析探討宮頸癌細胞對抗順鉑的相關機制,通過分析細胞周期蛋白Ⅰ(CyclinⅠ)的下游蛋白及其本身表達改變后,宮頸癌細胞耐藥程度的改變,探討細
2、胞周期蛋白Ⅰ在順鉑耐藥具體過程中發(fā)揮的作用,為下一步探討抑制宮頸癌細胞對順鉑的耐藥性打下一定基礎。
方法:本研究按照年齡和臨床分期、病理分期,選取了30例宮頸癌病人的腫瘤組織標本入組。采用實時聚合酶鏈反應(qRT-PCR)技術分析腫瘤細胞中細胞周期蛋白Ⅰ的表達,應用蛋白印跡試驗(Western Blot,WB)檢測下游蛋白質分子的表達變化。應用細胞增殖試驗及異種移植試驗檢測順鉑對宮頸癌細胞的毒性變化。慢病毒介導的基因高表達和s
3、iRNA介導的基因水平下調被用來觀察細胞周期蛋白Ⅰ在宮頸癌耐藥過程中的作用。
結果:腫瘤細胞中細胞周期蛋白Ⅰ的濃度與順鉑耐藥正相關。實驗結果證實,化療期間對順鉑產(chǎn)生耐藥的宮頸癌病人中,細胞周期蛋白Ⅰ存在高表達。穩(wěn)定高表達的細胞周期蛋白Ⅰ使HeLa細胞對更高濃度的順鉑也產(chǎn)生了抵抗。同時,體外實驗證明上調細胞周期蛋白Ⅰ水平能夠明顯增加體外腫瘤細胞生長速率,體內實驗證明上調細胞周期蛋白Ⅰ水平能夠增加體內腫瘤細胞對順鉑的耐藥性。
4、> 通過對CyclinⅠ下游分子的檢測發(fā)現(xiàn),細胞周期蛋白Ⅰ促進了細胞周期蛋白依賴性蛋白激酶5(Cdk-5)的高表達,而Cdk-5通過阻止宮頸癌細胞系的凋亡達到促進順鉑耐藥的作用。與此相一致,在細胞周期蛋白Ⅰ高表達的Hella細胞系中,通過siRNA(Small interfering RNA)的作用減少Cdk5蛋白表達,可以增加腫瘤細胞對順鉑的敏感性。
結論:細胞周期蛋白Ⅰ及其下游蛋白質Cdk5與宮頸癌細胞對順鉑的耐藥性有關
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