類胡蘿卜素對(duì)小鼠前脂肪細(xì)胞3T3-L1增殖和分化的影響.pdf

1、類胡蘿卜素是一類由微生物以及植物合成的天然色素，是以多個(gè)形成共軛的碳碳雙鍵為生色系結(jié)構(gòu)的脂環(huán)族或著脂肪族類型的脂溶性色素。類胡蘿卜素的種類多、涵蓋范圍廣，顏色變化是由黃色到橙紅色各不相同。普遍存在于水果和蔬菜中的類胡蘿卜素賦予各種水果和蔬菜以鮮艷明亮的顏色，同時(shí)也作為水果和蔬菜中的重要營養(yǎng)成分而備受廣泛關(guān)注。
　　眾所周知，類胡蘿卜素是一種非常優(yōu)秀的生物類抗氧化劑。大量研究結(jié)果表明，類胡蘿卜素能夠降低一些慢性疾病的發(fā)病危險(xiǎn)，比如冠

2、狀動(dòng)脈血管疾病和癌癥等。肥胖是脂肪細(xì)胞數(shù)量的增加以及細(xì)胞本身體積的變大而導(dǎo)致的脂肪組織過度積累的結(jié)果。存儲(chǔ)脂質(zhì)、分泌各種脂肪因子都是脂肪細(xì)胞的特有功能，除此之外，脂肪細(xì)胞還可以影響和調(diào)控脂肪細(xì)胞或者其它組織甚至整個(gè)生命體的生理代謝過程。肥胖病癥可以通過抑制脂肪細(xì)胞的增殖和分化來預(yù)防和治療。一些動(dòng)物和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明一些類胡蘿卜素，如新黃質(zhì)、巖藻黃質(zhì)以及?-隱黃質(zhì)，能夠有效地抑制脂肪細(xì)胞的增殖和分化，導(dǎo)致脂肪組織發(fā)生改變。前脂肪細(xì)胞的增殖以及

3、分化這兩個(gè)過程構(gòu)成了脂肪的合成過程，這是一個(gè)由多種基因參與的嚴(yán)密并且復(fù)雜的過程。到現(xiàn)在為止，已經(jīng)有超過600個(gè)基因被發(fā)現(xiàn)與肥胖有關(guān)，其中很多研究結(jié)果顯示，過氧化物酶體增殖物激活受體 gamma（PPARγ）是脂肪細(xì)胞分化的關(guān)鍵調(diào)節(jié)者之一，并參與了很多生理與病理過程，如脂質(zhì)和糖代謝過程以及糖尿病、高血壓等疾病的發(fā)生。瘦素（lep）、脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白（FABP4）以及乙酰輔酶A羧化酶（ACACA）等蛋白都是脂肪細(xì)胞特有的并參與細(xì)胞脂

4、肪酸代謝過程的重要蛋白?，F(xiàn)有的一些研究結(jié)果表明，脂肪細(xì)胞增殖和分化受抑制與基因PPARγ的表達(dá)量降低有關(guān)；也與三種脂肪細(xì)胞特有蛋白lep、FABP4和ACACA的表達(dá)調(diào)控關(guān)聯(lián)。研究類胡蘿卜素在3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖和分化過程中所產(chǎn)生的影響，檢測(cè)在此過程中對(duì)基因 PPARγ、lep、FABP4及ACACA蛋白的表達(dá)調(diào)控作用，探究其中的關(guān)聯(lián)，有助于通過營養(yǎng)干預(yù)防止肥胖發(fā)生的醫(yī)學(xué)策略的制定與實(shí)施。
　　本實(shí)驗(yàn)以小鼠前脂肪細(xì)胞3T3-

5、L1為靶細(xì)胞，研究不同濃度的胭脂樹橙、番茄紅素和β-胡蘿卜素對(duì)其增殖和分化的影響，并進(jìn)一步探索該過程中 PPARγ、lep、FABP4以及ACACA所發(fā)揮的可能作用。研究方法如下：（1）用DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液（含10％ FBS）在37℃、5% CO2的條件下培養(yǎng)小鼠前脂肪細(xì)胞3T3-L1，同時(shí)建立該細(xì)胞的分化模型；（2）取處于對(duì)數(shù)生長期的3T3-L1前脂肪細(xì)胞加藥處理三天，用四甲基偶氮唑鹽（MTT）法檢測(cè)細(xì)胞的存活率；（3）用經(jīng)典“雞尾酒

6、法”進(jìn)行誘導(dǎo)分化，并在誘導(dǎo)第三天加藥處理；（4）先用油紅O染液將處理組以及對(duì)照組的脂肪細(xì)胞進(jìn)行染色，然后再應(yīng)用染色比色法來檢測(cè)脂肪細(xì)胞的分化程度；（5）利用Western Blotting技術(shù)從蛋白質(zhì)水平檢測(cè)PPARγ、lep、FABP4以及ACACA在類胡蘿卜素影響下的基因的表達(dá)的情況。
　　研究結(jié)果顯示：
　　1、胭脂樹橙、番茄紅素和β-胡蘿卜素對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞的增殖起抑制作用，并且與其濃度呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)關(guān)系。<

7、br>　　2、胭脂樹橙、番茄紅素和β-胡蘿卜素對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞的分化起抑制作用。
　　3、胭脂樹橙、番茄紅素和β-胡蘿卜素能夠下調(diào)基因PPARγ、lep和FABP4的表達(dá)，同時(shí)上調(diào)基因ACACA的表達(dá)。
　　4、以上結(jié)果表明，胭脂樹橙、番茄紅素和β-胡蘿卜素對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞的增殖和分化產(chǎn)生的抑制作用可以通過 PPARγ信號(hào)通路來實(shí)現(xiàn)，通過調(diào)節(jié)lep、FABP4和ACACA的蛋白表達(dá)，影響細(xì)胞脂肪酸的合成與積累