中國河南一先天性無虹膜家系PAX6基因致病性新突變位點(diǎn)的篩查與驗證.pdf

1、背景與目的：
　　先天性無虹膜是臨床較為罕見的先天性遺傳性眼部疾病，特征表現(xiàn)為雙眼虹膜組織發(fā)育不良或正常虹膜組織缺如，部分患者伴發(fā)黃斑及視神經(jīng)發(fā)育不良、白內(nèi)障、青光眼、眼球震顫、弱視、斜視、屈光不正等眼部疾病。研究顯示，PAX6基因與先天性無虹膜密切相關(guān)。全球范圍內(nèi)，先天性無虹膜發(fā)病率為1/64000~1/96000，無種族、地區(qū)、年齡、性別差異，其中約2/3患者有家族史，約1/3為散發(fā)。85％先天性無虹膜為常染色體顯性遺傳，13

2、%伴發(fā)于WAGR綜合癥，2%為常染色體隱性遺傳。
　　資料與方法：
　　收集2014年8月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院眼二科就診的一個先天性無虹膜三代家系，共9名成員，其中男性患者2例，女性患者3例，正常家系成員4名。采集9名家系成員血樣，同時隨機(jī)搜集100名與本家系無關(guān)的正常健康體檢者。所有參與研究人員進(jìn)行詳細(xì)的全身檢查，排除全身系統(tǒng)性疾病，進(jìn)行詳細(xì)的眼部檢查，采集眼底、眼前節(jié)照相等。
　　使用酚-氯仿法提取血樣中的DNA

3、，根據(jù)PAX6基因的14個外顯子設(shè)計引物，進(jìn)行特定片段的PCR擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳純化，進(jìn)行雙向DNA測序。使用DNAStar軟件分析測序結(jié)果。
　　使用GeneJETRNA純化試劑盒提取血樣淋巴細(xì)胞中的RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。利用MaximaSYBRGreenqPCR檢測試劑盒進(jìn)行實時定量熒光PCR。以β-肌動蛋白基因作為參照。配制體系，加樣，使用Mx3000P實時熒光定量PCR儀軟件讀取數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果

4、：
　　該家系的遺傳方式為明顯的常染色體顯性遺傳，所有患者均表現(xiàn)為單純的眼部異常不伴有任何全身或其他系統(tǒng)性疾病。家系中5例患者臨床表現(xiàn)相似，包括先天性無虹膜、畏光、眼球鐘擺樣水平震顫，其中3例成年患者患白內(nèi)障，2例患兒未患白內(nèi)障。
　　使用DNAStar軟件分析測序結(jié)果，發(fā)現(xiàn)該家系中所有患者的PAX6基因10號外顯子發(fā)生移碼突變，第796位脫氧核糖核苷酸G缺失（c.796delG），導(dǎo)致產(chǎn)生提前終止密碼子，但家系正常成員及1

5、00名對照者均不存在此突變。
　　實時熒光定量PCR檢測比較，家系中先天性無虹膜患者PAX6基因mRNA的水平比家系中正常人PAX6基因mRNA的水平降低約50%。
　　結(jié)論：
　　1.本研究中我們發(fā)現(xiàn)了PAX6基因中的一個新的突變位點(diǎn)（c.796delG，p.A266fs）導(dǎo)致移碼突變，編碼同源結(jié)構(gòu)域基因序列中出現(xiàn)提前終止密碼子，導(dǎo)致脯氨酸-絲氨酸-蘇氨酸的結(jié)構(gòu)域缺失。
　　2.實時熒光定量PCR發(fā)現(xiàn)，突變的P