辣椒素不同劑量、時(shí)期對(duì)大鼠胃動(dòng)力的影響及機(jī)制.pdf

1、目的：研究辣椒素(CAP)不同劑量、不同時(shí)期對(duì)大鼠胃動(dòng)力的影響及機(jī)制。
　　方法：⑴分組:實(shí)驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組D組，其中實(shí)驗(yàn)組根據(jù)CAP不同劑量0.1mg/kg/d、1mg/kg/d、5mg/kg/d分為A組、B組、C組。⑵分期:實(shí)驗(yàn)分4期完成，分期方法:Ⅰ期為3天，Ⅱ期為1周，Ⅲ期為2周，Ⅳ期為4周。故每組按照分期方法又分4個(gè)小組，例如:A組又分為A1、A2、A3、A4分別對(duì)應(yīng)4期，每組每期大鼠10只，共160只。⑶CAP溶液

2、的配制:各稱(chēng)取1mg、10mg、50mgCAP，將稱(chēng)重后CAP分別充分溶解于10％吐溫20ml+10％酒精1ml+0.9％HCL79ml的CAP溶劑中，獲得濃度為0.01mg/ml、0.1mg/ml、0.5mg/ml CAP溶液。⑷CAP給藥方法:A組:給予大鼠0.01mg/mlCAP溶液，劑量0.1mg/kg/d，每天灌胃1次。完成后給予普通飼料，自由進(jìn)食進(jìn)水;B組:給予大鼠0.1mg/mlCAP溶液，劑量1mg/kg/d，每天灌胃1

3、次。完成后給予普通飼料，自由進(jìn)食進(jìn)水;C組:給予大鼠0.5mg/mlCAP溶液，劑量5mg/kg/d，每天灌胃1次。完成后給予普通飼料，自由進(jìn)食進(jìn)水;D組:CAP溶劑2.5ml灌胃，每天1次，完成后給予普通飼料，自由進(jìn)食進(jìn)水。⑸檢測(cè)指標(biāo)：一般情況:實(shí)驗(yàn)過(guò)程中觀察大鼠的精神狀態(tài)、食欲、大小便等一般情況；采用核素顯像法檢測(cè)胃排空，記錄所有大鼠胃半排空時(shí)間(T50％)，測(cè)定第65min胃排空率(GE65％)；大鼠胃粘膜屏障的檢測(cè):3％戊巴比妥

4、鈉處死大鼠，將胃完整取出，沿胃大彎剪開(kāi)，生理鹽水沖洗干凈，肉眼觀察粘膜情況，采用Guth標(biāo)準(zhǔn)改良評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定胃粘膜損傷情況;取胃體組織1塊，行HE染色病理組織學(xué)檢查，采用Masuda標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定胃黏膜病理?yè)p傷情況；免疫組化檢測(cè)胃黏膜TRPV1、CGRP、SP的表達(dá)，并用彩色病理圖像分析軟件分析指標(biāo)的陽(yáng)性指數(shù)。
　　結(jié)果：①大鼠一般情況:所有實(shí)驗(yàn)大鼠精神狀態(tài)良好，行動(dòng)靈活，食欲佳，皮毛光滑，大小便正常，無(wú)死亡。②大鼠胃半排空時(shí)間(T50

5、％)(min):A1、A2、A3、A4組T50％(min)分別是:32.36±5.86(min)、35.18±6.73(min)、36.91±4.77(min)、29.32±3.26(min);B1、B2、B3、B4組T50％(min)分別是:42.06±4.99(min)、44.93±7.88(min)、34.05±5.29(min)、23.87±3.59(min);C1、C2、C3、C4組T50％(min)分別是:45.65±6.7

6、3(min)、41.35±5.92(min)、29.56±5.58(min)、25.79±4.52(min);D1、D2、D3、D4組 T50％(min)分別是:23.15±4.52(min)、26.17±4.33(min)、26.89±6.93(min)、22.56±4.98(min)。CAP干預(yù)與對(duì)照組T50％比較:A組與D組比較:A1、A2、A3、A4組T50％較D1、D2、D3、D4組顯著延長(zhǎng)(P＜0.05);B組與D組比較:

7、B1、B2、B3組T50％較D1、D2、D3組顯著延長(zhǎng)(P＜0.05);C組與D組比較:C1、C2組T50％較D1、D2組顯著延長(zhǎng)(P＜0.05)。不同劑量CAP干預(yù)T50％(min)比較:A組與B組:A1、A2組T50％較B1、B2組顯著縮短(P＜0.05)，A4組T50％較B4組延長(zhǎng)(P＜0.05);A組與C組:A1、A2組T50％較C1、C2組顯著縮短(P＜0.05)，A3組T50％較C3組顯著延長(zhǎng)(P＜0.05);B組與C組各期

8、比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不同時(shí)期CAP干預(yù)T50％(min)比較:其中A4組T50％較A2、A3組顯著縮短(P＜0.05);B1組T50％較B3、B4組時(shí)間延長(zhǎng)(P＜0.05)，B2組T50％較B3、B4組時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P＜0.05), B3組T50％較B4組顯著延長(zhǎng)(P＜0.05);C1組T50％較C3、C4組顯著延長(zhǎng)(P＜0.05),C2組T50％較C3、C4組顯著延長(zhǎng)(P＜0.05);D組各期兩兩比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③大鼠第65min胃

9、排空率(GE65min％):A1、 A2、 A3、 A4組GE65min％分別是:59.36±8.86、61.18±6.73、62.01±5.77、63.32±7.26; B1、 B2、 B3、 B4組GE65min％分別是:58.31±13.78、61.10±7.88、61.93±6.29、68.74±13.59; C1、 C2、 C3、 C4組GE65min％分別是:60.39±10.74、62.44±7.56、65.17±12.4

10、4、70.53±7.56; D1、D2、 D3、 D4組T50％(min)分別是:76.17±13.56、74.93±10.78、71.35±14.30、73.82±11.46。 CAP干預(yù)與對(duì)照組GE65min％比較:A組與D組:其中A1組＜D1組(F=2.342, P=0.004)、 A2組＜D2組(F=2.566, P=0.003)、A3組＜D3組(F=4.544, P=0.043)、A4組＜D4組(F=2.492, P=0.02

11、5);B組與D組: B1組＜D1組(F=0.968, P=0.009)、B2組＜D2組(F=1.871,P=0.004)、 B3組＜D3組(F=3.824, P=0.045);C組與D組GE65min％比較:C1組＜D1組(F=1.594, P=0.010)、C2組＜D2組(F=2.033, P=0.008)。C3、 C4組與D3、 D4組相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。④大鼠胃黏膜組織TRPV1光密度(PI)值:A1、 A2、 A3、 A4組TR

12、PV1PI值分別是:1.83±0.22、1.89±0.18、1.87±0.14、1.93±0.14; B1、 B2、 B3、 B4組TRPV1 PI值分別是:1.82±0.20、1.90±0.24、1.94±0.27、1.87±0.20; C1、 C2、 C3、C4組TRPV1PI值分別是:1.89±0.26、1.95±0.29、1.93±0.22、1.85±0.25; D1、 D2、 D3、 D4組TRPV1 PI值分別是:1.57±

13、0.17、1.64±0.15、1.65±0.21、1.59±0.16。CAP干預(yù)與對(duì)照組TRPV1PI值比較:A組與D組:A1組＞D1組(F=0.597, P=0.008)、 A2組＞D2組(F=0.465, P=0.037)、A3組＞D3組(F=2.250, P=0.013)A4組＞D4組(F=1.316, P＜0.05);B組與D組:B1組＞D1組(F=0.723, P=0.007)、B2組＞D2組(F=0.391,P=0.009)

14、、B3組＞D3組(F=0.065, P=0.015、 B4組＞D4組(F=0.391,P=0.009);C組與D組:C1組＞D1組(F=0.428, P=0.04)、C2組＞D2組(F=0.268, P=0.008)、C3組＞D3組(F=0.911, P=0.009)、C4組＞D4組(F=0.64, P＜0.05)。不同劑量CAP干預(yù)TRPV1 PI值比較:A組與C組、A組與B組、B組與C組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不同時(shí)期CAP干預(yù)TRPV1

15、PI值比較:A、B、C、D組各期組內(nèi)胃黏膜組織TRPV1光密度(PI)兩兩比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑤大鼠胃黏膜組織CGRP光密度(PI)值:A1、 A2、 A3、A4組CGRP PI值分別是:3.93±0.42、3.61±0.48、3.29±0.34、3.31±0.46; B1、 B2、 B3、 B4組CGRP PI值分別是:4.72±0.50、4.68±0.52、3.63±0.57、3.10.±0.39; C1、 C2、 C3、 C4組C

16、GRP PI值分別是:4.89±0.56、4.95±0.48、3.18±0.52、2.95±0.45; D1、 D2、 D3、 D4組CGRPPI值分別是:2.57±0.47、2.64±0.55、2.75±0.61、2.69±0.56。CAP干預(yù)與對(duì)照組CGRP PI值比較:A組與D組:A1組＞D1組(F=1.252, P＜0.05)、A2組＞D2組(F=2.095, P＜0.05)、A3組＞D3組(F=3.325, P=0.027)、

17、A4組＞D4組(F=1.482, P=0.014);B組與D組:B1組＞D1組(F=0.884,P＜0.05)、B2組＞D2組(F=1.119,P＜0.05)、 B3組＞D3組(F=1.183,P=0.004)。B4組與D4組相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;C組與D組:C1組＞D1組(F=0.704,P＜0.001)、C2組＞D2組(F=1.313, P＜0.05)。C3組、C4組與D3、 D4組相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不同劑量CAP干預(yù)CGRP PI

18、值比較:A組與B組:A1、 A2組大鼠胃黏膜CGRP表達(dá)比B1、 B2組大鼠表達(dá)顯著減少(P＜0.05);A組與C組:A1、A2組大鼠胃黏膜CGRP表達(dá)比C1、C2組表達(dá)顯著減少(P＜0.05)，C4組大鼠胃黏膜CGRP表達(dá)下降明顯，且明顯小于A4組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;B組與C組: B1、B2、B4組大鼠胃黏膜CGRP表達(dá)與C1、C2、C4組相比無(wú)差異(P＞0.05)，C3＜B3組(P＜0.05)。不同時(shí)期CAP干預(yù)CGRP PI值比較:A組

19、各期:A1＞A3(P＜0.05)，A2＞A4(P＜0.05)，A1＞A4(P＜0.05);B組各期:B2＞B3(P＜0.05),B1＞B3(P＜0.05),B2＞B4(P＜0.05),B1＞B4(P＜0.05), B3＞B4(P＜0.05);C組各期:C2＞C3(P＜0.05),C1＞C3(P＜0.05) C2＞C4(P＜0.05)，C1＞C4(P＜0.05);D組各期大鼠胃黏膜CGRP光密度(PI)值比較無(wú)明顯變化。6.大鼠胃黏膜SP

20、光密度(PI)值:A1、A2、A3、A4組PI值分別是:1.28±0.18、1.27±0.14、1.27±0.11、1.30±0.17; B1、B2、B3、B4組PI值分別是:1.30±0.10、1.24±0.12、1.26±0.11、1.29±0.09; C1、C2、C3、C4組PI值分別是:1.29±0.22、1.25±0.14、1.28±0.13、1.30±0.19;;D1、D2、D3、D4組PI值分別是:1.27±0.17、1.

21、23±0.11、1.26±0.15、1.29±0.12。CAP干預(yù)與對(duì)照組SP PI值比較:A、B、C組大鼠胃黏膜SP表達(dá)與D組相應(yīng)各期相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不同劑量CAP干預(yù)SP PI值比較:A組與B組、A組與C組、 B組與C組大鼠胃黏膜SP表達(dá)相比較，相應(yīng)各期大鼠胃黏膜SP表達(dá)均無(wú)明顯差異，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不同時(shí)期CAP干預(yù)SP PI值比較:A、B、C、D組大鼠胃黏膜SP表達(dá)組內(nèi)比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑥胃粘膜損傷指數(shù):肉眼觀察所有實(shí)驗(yàn)組及

22、對(duì)照組大鼠胃粘膜光滑，未見(jiàn)明顯出血、糜爛灶。根據(jù)Guth改良評(píng)分，均為0分。胃粘膜損傷病理評(píng)分:HE染色光學(xué)顯微鏡下觀察:所有標(biāo)本黏膜層結(jié)構(gòu)完整，深層腺體排列整齊，未見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，組織結(jié)果完整。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組大鼠胃黏膜Masude評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：⑴CAP抑制胃動(dòng)力:正常大鼠給予0.1mg/kg、1mg/kg、5mg/kg劑量CAP溶液灌胃3天-4周均有抑制胃排空作用，且劑量越大抑制作用越強(qiáng)，隨著