青藤堿對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型小鼠BMDC表面模式識別受體TLR2-TLR4的免疫調(diào)節(jié)機制研究.pdf

1、目的：既往研究發(fā)現(xiàn)青藤堿能影響模式識別受體下游的分子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及表達(dá)，但其機理有待深入研究。本課題提出青藤堿可能通過影響模式識別受體進(jìn)而治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的假說。通過離體培養(yǎng)RA動物骨髓來源的DC,探索青藤堿對RA小鼠模式識別受體的影響，評價其在RA發(fā)病機制及病情進(jìn)展中的作用，為青藤堿臨床應(yīng)用及上市后的評價提供實驗室依據(jù)。
　　方法：SPF級 balb/c小鼠，依據(jù)文獻(xiàn)進(jìn)行改良后建立膠原誘導(dǎo)型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型（CIA），造模成功后脫頸

2、處死小鼠，按照文獻(xiàn)改良后進(jìn)行骨髓來源的DC培養(yǎng)，第5天時加入LPS刺激DC成熟，在第6天時采用流式細(xì)胞直接免疫熒光標(biāo)記法對所得的細(xì)胞檢測 CD11c，CD86的表達(dá)情況以鑒定 DC細(xì)胞。把培養(yǎng)成熟的DC分為青藤堿高劑量組、青藤堿中劑量組、青藤堿低劑量組、模型組、空白組、甲氨蝶呤組，各組予以不同濃度青藤堿干預(yù)24小時后運用流式細(xì)胞技術(shù)檢測 TLR2、TLR4的表達(dá)情況，并將細(xì)胞培養(yǎng)上清液采用elisa法檢測其 IL-1、IL-10、TNF

3、-α的水平。所有實驗數(shù)據(jù)采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果：1、牛Ⅱ型膠原聯(lián)合完全弗氏佐劑對小鼠進(jìn)行尾根部、腹部、足墊注射后在35天左右誘導(dǎo)出RA模型；2、IL-4及GM-CSF在第5天左右能夠誘導(dǎo)骨髓源細(xì)胞轉(zhuǎn)化為DC且DC在培養(yǎng)過程中常常處于集落狀態(tài)；3、模型組小鼠 TLR2、TLR4的表達(dá)明顯高于空白組小鼠，提示類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎造模過程可能影響小鼠 BMDC表面 TLR的表達(dá)；4、青藤堿干預(yù)后能夠降低小鼠 BMDC表