人參皂苷Re促進坐骨神經(jīng)損傷后周圍神經(jīng)再生的機制研究.pdf

1、目的：
　　1、基于人參皂苷Re在體內(nèi)和體外都通過不同的機制來發(fā)揮生理學功能的特性，探索能夠促進神經(jīng)再生的有效藥物。
　　2、在坐骨神經(jīng)損傷(SNC)大鼠模型中，評估人參皂苷Re對施萬細胞的增殖、分化和遷移的影響。
　　3、探索人參皂苷Re處理的坐骨神經(jīng)損傷模型中周圍神經(jīng)損傷修復的機制。
　　方法：
　　1、動物模型的建立與取材
　　(1)選用健康成年SD大鼠(180-220g)，雌雄不限。
　

2、　(2)將健康成年SD大鼠放置在動物中心適應(yīng)性生長14大，食水不限。
　　(3)將大鼠分成Normal組(n=4)，Saline組(n=4)，損傷組，（Re用量分別為0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0mg/kg，每組n=4），Normal組不作處理，Sanline組給予同劑量的生理鹽水。連續(xù)給藥三周。
　　(4)在給藥的第二周，選取大鼠，應(yīng)用復合麻醉劑(3ml/kg)施以腹腔注射，使得大鼠麻醉。
　　(

3、5)應(yīng)用嚴格滅菌的手術(shù)器械于大鼠右側(cè)大腿中間部切開，暴露出坐骨神經(jīng)，找到距離其分叉0.5cm處。
　　(6)坐骨神經(jīng)夾傷模型的建立，應(yīng)用滅菌止血鉗夾3次，每次持續(xù)10s，三次之間間隔10s。
　　(7)坐骨神經(jīng)缺損模型的建立，應(yīng)用滅菌器械分別造成0.2、0.5、1cm的缺損。
　　(8)根據(jù)坐骨神經(jīng)損傷后所設(shè)的8個觀察時相點隨機將大鼠分為8個實驗組:0小時（即正常組）、6小時、12小時、1天、3天、5天、1周和2周。每

4、個實驗組6只大鼠，其中3只用于免疫印跡，另外3只用于組織切片檢測。
　　2、運用足跡分析評估坐骨神經(jīng)功能指數(shù)(SFI)和展趾功能指數(shù)(TSI)。
　　3、免疫印跡和免疫熒光檢測坐骨神經(jīng)損傷后周圍神經(jīng)再生的指標變化情況。
　　4、免疫印跡檢測人參皂苷Re對p-ERK、p-JNK、p-p38表達變化的影響。
　　5、細胞水平檢測人參皂苷Re對施萬細胞遷移作用的影響。
　　結(jié)果：
　　1、免疫印跡結(jié)果顯示，

5、坐骨神經(jīng)損傷后，人參皂苷Re可以以劑量依賴性的方式調(diào)節(jié)增殖細胞核抗原(PCNA)的表達。
　　2、電鏡組織學分析表明2.0mg/kg人參皂苷Re可以保護坐骨神經(jīng)，促進髓鞘的再生，保護神經(jīng)纖維的形狀。
　　3、免疫熒光結(jié)果表明軸突生長相關(guān)蛋白（GAP-43），施萬細胞的marker(S-100)，神經(jīng)元的marker(NF-200)在人參皂苷Re作用下，與坐骨神經(jīng)損傷對照組相比其表達發(fā)生了明顯的變化。
　　4、免疫熒光雙

6、標結(jié)果顯示，坐骨神經(jīng)損傷模型中，人參皂苷Re可以顯著增強施萬細胞中PCNA的表達。
　　5、免疫印跡以及免疫熒光雙標結(jié)果表明在坐骨神經(jīng)損傷模型中，人參皂苷Re可以顯著增強施萬細胞中八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子6(Oct-6)的表達，并能促進施萬細胞的分化。
　　6、免疫印跡結(jié)果表明在提取的原代施萬細胞中，人參皂苷Re可以顯著增加p-ERK、p-JNK的表達，而對p-p38的表達卻沒有明顯的影響。
　　7、運用trans-well