10個(gè)先天性眼球震顫家系致病基因研究.pdf

1、目的:
　　先天性眼球震顫（Congenital Nystagmus，CN）具有遺傳異質(zhì)性，可表現(xiàn)為常染色體顯性、常染色體隱性和X連鎖三種遺傳模式。目前為止，位于Xq26.2的FRMD7基因是唯一發(fā)現(xiàn)與 X連鎖先天性特發(fā)性眼球震顫（Congenital Idiopathic Nystagmus，CIN）有關(guān)的致病基因。本研究對(duì)10個(gè)CN家系和5名散發(fā)患者進(jìn)行FRMD7基因直接測(cè)序，旨在篩查患者的致病性突變，分析FRMD7基因突變對(duì)

2、蛋白結(jié)構(gòu)和功能造成的影響,構(gòu)建攜有 FRMD7基因突變的永生化細(xì)胞系以利致病基因的功能研究。
　　方法:
　　1、收集2013年6月至2014年6月于天津市眼科醫(yī)院斜視與小兒眼科就診的CN家系和散發(fā)患者,對(duì)CN患者及其直系親屬進(jìn)行臨床表型分析。
　　2、從患者及正常人的外周血中提取基因組DNA,使用PCR儀擴(kuò)增FRMD7基因的12個(gè)外顯子片段，純化和回收目的片段后，應(yīng)用ABI3130-avant全自動(dòng)遺傳分析儀進(jìn)行FR

3、MD7基因篩查，DNAstar5.01軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。
　　3、分析FRMD7基因新發(fā)現(xiàn)的突變對(duì)蛋白的影響，應(yīng)用生物醫(yī)學(xué)軟件預(yù)測(cè)HSF剪切突變對(duì)FRMD7蛋白結(jié)構(gòu)和功能的破壞程度。
　　4、建立攜有FRMD7基因突變的細(xì)胞系：使用淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化法建立永生化B淋巴細(xì)胞系；DispaseⅡ酶消化法建立皮膚成纖維細(xì)胞系。
　　結(jié)果:
　　1、本研究共篩查出6個(gè) FRMD7基因突變,分別為 c.57+2T>C、c.58

4、-3T>A、c.685C>T、c.910C>T、c.980_983delATTA＆c.986C>A、c.1860_1861delAG，而在100例正常人的FRMD7基因中未發(fā)現(xiàn)相同改變。
　　2、c.57+2T>C、c.58-3T>A、c.1860_1861delAG是新發(fā)現(xiàn)的FRMD7基因突變：c.1860_1861delAG可能生成一個(gè)含有647個(gè)氨基酸的截短蛋白；應(yīng)用Human Splicing Finder-version

5、2.4.1軟件預(yù)測(cè)c.57+2T>C可以造成野生型FRMD7基因剪切位點(diǎn)破壞，而58-3T>A對(duì)FRMD7基因剪切影響很小。
　　3、本研究中含有 FRMD7基因突變的患者眼球震顫多表現(xiàn)為水平?jīng)_動(dòng)型，均不伴有異常眼位，3/6的患者伴有代償頭位；不含有FRMD7基因突變的患者，眼球震顫除水平外可合并垂直和旋轉(zhuǎn)成分，沖動(dòng)型和擺動(dòng)型均有，部分患者表現(xiàn)有點(diǎn)頭痙攣，3/9伴有異常眼位，4/9的患者伴有代償頭位，2/9眼位和頭位均正常。

6、>　　4、本研究中所有的患者均伴有不同程度的視力下降，合并有屈光不正和弱視；含有相同F(xiàn)RMD7基因突變的患者臨床表型存在差異。
　　5、成功建立含有FRMD7基因突變的永生化B淋巴細(xì)胞系和皮膚成纖維細(xì)胞系，可無(wú)限傳代用于提取基因組DNA和研究FRMD7基因功能。
　　結(jié)論:
　　1、5個(gè)CN家系和1名散發(fā)患者篩查出FRMD7基因突變，共6個(gè)基因突變，其中包括3個(gè)新突變和3個(gè)已知突變，對(duì)擴(kuò)充 FRMD7基因突變譜系、探索

7、FRMD7導(dǎo)致XL-CIN發(fā)生的致病機(jī)制具有重要研究?jī)r(jià)值。
　　2、FRMD7基因不同突變?cè)斐傻谋磉_(dá)缺陷直接與臨床表型相關(guān)。含有相同F(xiàn)RMD7基因突變的CN患者，無(wú)論祖先來(lái)源是否相同，臨床表型均存在差異。對(duì)攜有FRMD7基因突變的CN患者來(lái)說(shuō)，基因型和臨床表型的關(guān)系不能確定，仍需要大樣本的臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　3、5個(gè)CN家系和4名散發(fā)患者未篩查出FRMD7基因突變，患者臨床表型較含有FRMD7基因突變的患者復(fù)雜，這