脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞對腹腔巨噬細(xì)胞活化方向的影響.pdf

1、目的：
　　在局部組織中，脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(ADMSC)不僅因其干性具有組織再生功能，而且還具備促進(jìn)創(chuàng)傷愈合，調(diào)節(jié)免疫的功能。而巨噬細(xì)胞的M2a及M2b/c型同樣具有這樣的功能。研究ADMSC對巨噬細(xì)胞活化方向的影響，可以了解ADMSC是否通過影響巨噬細(xì)胞來實(shí)現(xiàn)其在局部治療中的功能，完善ADMSC移植治療的機(jī)制研究，并為擴(kuò)大ADMSC移植治療的應(yīng)用范圍奠定理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　提取C57BL/6小鼠的ADMSC及

2、腹腔巨噬細(xì)胞，利用流式細(xì)胞儀鑒定這兩種細(xì)胞。收集培養(yǎng)過第2代ADMSC24小時(shí)的培養(yǎng)液(ADMSC CM)用以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞。以未活化的巨噬細(xì)胞作為對照組;利用脂多糖(LPS)模擬局部炎癥，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞24小時(shí)，使其活化為促炎的M1型巨噬細(xì)胞;同時(shí)利用IL-4、IL-13誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞24小時(shí)，使其活化為M2型巨噬細(xì)胞。使用ADMSC CM分別誘導(dǎo)上述兩種巨噬細(xì)胞，以及未活化的巨噬細(xì)胞48小時(shí)。觀察各組巨噬細(xì)胞的形態(tài)變化，提取各組細(xì)胞的mR

3、NA，總蛋白。利用流式細(xì)胞儀，實(shí)時(shí)熒光PCR，蛋白質(zhì)印跡，免疫熒光等方法檢測各型巨噬細(xì)胞的分類指標(biāo)以確定其在ADMSCCM誘導(dǎo)后的活化方向。檢測STAT3，STAT6，以及JNK通路的部分蛋白表達(dá)，以明確ADMSC CM影響巨噬細(xì)胞活化方向的具體機(jī)制。使用CCK-8檢測巨噬細(xì)胞的活力。
　　結(jié)果：
　　巨噬細(xì)胞在經(jīng)過ADMSC誘導(dǎo)后，細(xì)胞轉(zhuǎn)為梭形，并出現(xiàn)細(xì)胞凸起，符合M2型巨噬細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)。未活化的巨噬細(xì)胞及M1型巨噬細(xì)

4、胞向M2b/c型巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化。其M1型標(biāo)志(iNOS，IL-12，CD197，P＜0.05)表達(dá)降低，M2a型標(biāo)志(IL-27，IGF-1，P＜0.05)表達(dá)降低，M2b/c型標(biāo)志（IL-10，SPHK-1，P＜0.05）表達(dá)升高。而對于IL-4及IL-13誘導(dǎo)出的M2型巨噬細(xì)胞，ADMSC似乎并未改變巨噬細(xì)胞的活化類型。在這一過程中，STAT3及其下游的SOCS3，STAT6及其下游的IRF4被激活，JNK通路被抑制(P＜0.05)。

5、此外，巨噬細(xì)胞在被ADMSC誘導(dǎo)后，其細(xì)胞活力明顯增加。
　　結(jié)論：
　　ADMSC分泌的可溶性細(xì)胞因子，可將未活化的巨噬細(xì)胞及M1型的巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)為調(diào)節(jié)型(M2b/c)巨噬細(xì)胞。STAT3，STAT6及JNK通路涉及這一改變。和IL-4及IL-13誘導(dǎo)的M2型巨噬細(xì)胞不同，ADMSC誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞并不降低Bax的表達(dá)，而是提高巨噬細(xì)胞的細(xì)胞活力。這一結(jié)果提示ADMSC對巨噬細(xì)胞活化方向的影響是ADMSC在局部組織中起到免疫