一個(gè)中國先天性后極性白內(nèi)障家系致病基因篩查及致病機(jī)制的研究.pdf

1、目的:
　　篩查一個(gè)中國五代先天性白內(nèi)障家系的致病基因，并進(jìn)一步研究可能的致病機(jī)制。
　　方法:
　　根據(jù)白內(nèi)障表型，對(duì)候選致病基因編碼區(qū)及側(cè)翼序列直接測序。篩查到到突變位點(diǎn)通過限制性片段長度多態(tài)性分析驗(yàn)證。將帶有FLAG標(biāo)簽的野生型(WT)和突變型（Y219*）AQP0載體分別轉(zhuǎn)染到HEK293T細(xì)胞中，用相對(duì)定量PCR和Western blot檢測蛋白表達(dá)水平，用免疫熒光檢測蛋白的亞細(xì)胞定位。將FLAG-WT-AQ

2、P0與Myc-Y219*-AQP0共轉(zhuǎn)染到HEK293T細(xì)胞中，用免疫熒光研究野生和突變型蛋白的共定位。
　　結(jié)果:
　　我們篩查到MIP基因（主要內(nèi)源性膜蛋白基因）上一個(gè)新的無意突變位點(diǎn)(c.657 C＞G; p.Y219*)。在該家系中表型與基因型共分離。該突變使原來AQP0蛋白219位賴氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)榻K止密碼子(Y219*)。當(dāng)FLAG-WT-AQP0與FLAG-Y219*-AQP0分別單獨(dú)轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞時(shí)，野生型

3、與突變型mRNA水平無明顯差異，但Y219*-AQP0蛋白水平較野生型AQP0蛋白水平明顯下降。免疫熒光顯示野生型AQP0蛋白主要定位在細(xì)胞膜上，而Y219*-AQP0蛋白主要定位在細(xì)胞漿里。當(dāng)FLAG-WT-AQP0與Myc-MU-AQP0共轉(zhuǎn)染時(shí)，野生型與突變型蛋白均定位在細(xì)胞漿內(nèi)。
　　結(jié)論:
　　在該家系中篩查到的MIP基因上的無意突變(c.657 C＞G)是該家系的致病突變。突變蛋白對(duì)野生型蛋白的顯性負(fù)效應(yīng)使野生型