Arl13B通過調控Hedgehog信號通路影響胃癌細胞惡性生物學行為的分子機制.pdf

1、分類號：密級：UDC：學號：356520511003南昌大學博士研究生學位論文Arl13B通過調控通過調控Hedgehog信號通路影響胃癌細胞惡信號通路影響胃癌細胞惡性生物學行為的分子機制性生物學行為的分子機制MolecularmechanismofArl13BonbiologicalacteristicsofgastriccancercellsbyregulatingofHedgehogsignalingpathway邵佳培養(yǎng)單位（院

2、、系）：南昌大學第一附屬醫(yī)院指導教師姓名、職稱：羅時文教授申請學位的學科門類：醫(yī)學學科專業(yè)名稱：內科學論文答辯日期：2015年11月答辯委員會主席：評閱人：2015年11月摘要摘要第一部分：第一部分：Arl13B與Smo相互作用相互作用目的：目的：驗證Arl13B與Smo的相互作用，確定其結合位點。方法：方法：利用基因克隆技術構建pcDNA3.0FlagSmopGFPArl13B真核表達載體及pGEX6P1Arl13B原核表達載體的全長

3、及各個片段，通過免疫共沉淀（coIP）、體外GSTpulldown、免疫細胞化學實驗進一步驗證其在哺乳動物細胞中的相互作用及確定結合位點。結果：結果：免疫共沉淀（內源性和外源性）實驗均證實Arl13B與Smo有相互作用，且配體Shh刺激后其結合能力增強，免疫細胞化學實驗、GSTpulldown同樣得到陽性結果；確定Arl13B結構中的GTPbindingdomain(1150aa)與Smo的胞內C端（550787aa）相互作用。結論：結

4、論：Arl13B的GTPbindingdomain(1150aa)與Smo的胞內C端(550787aa)相互作用。關鍵詞：關鍵詞：免疫共沉淀，相互作用，Arl13B第二部分：第二部分：Arl13B對胃癌細胞惡性生物學行為的影響對胃癌細胞惡性生物學行為的影響目的：目的：研究Arl13B對胃癌細胞惡性生物學行為的影響。方法：方法：選取相應的胃癌細胞系，分別通過慢病毒技術構建Arl13B穩(wěn)定下調細胞系、Arl13B穩(wěn)定過表達細胞系，經Shh刺

5、激前后通過平板克隆形成實驗、細胞遷移實驗及Transwell侵襲實驗檢測對胃癌細胞增殖、遷移及侵襲的影響；裸鼠實驗：觀察皮下移植瘤的生長。通過多西環(huán)素45周的誘導表達后，處死裸鼠，切取移植瘤，并通過WB及免疫組化檢測相關信號通路指標的變化。結果：結果：1，干擾Arl13B后，經Shh刺激穩(wěn)定細胞系AGS、SGC7901后增殖、遷移及侵襲力較對照組明顯減弱。2，過表達Arl13B后，經Shh刺激穩(wěn)定細胞系MKN28后增殖、遷移及侵襲力較對