尼氏真綏螨性別決定相關(guān)基因的研究.pdf

1、昆蟲和高等動(dòng)物都已發(fā)現(xiàn)參與個(gè)體發(fā)育的Sox與Dmrt基因家族，這兩個(gè)基因家族在進(jìn)化上高度保守。Dmrt基因家族與性別決定相關(guān)，該家族成員都含有一個(gè)具有DNA結(jié)合能力的保守基序―DM結(jié)構(gòu)域，以鋅指結(jié)構(gòu)與特異DNA序列結(jié)合，在性別決定和分化發(fā)育的調(diào)控中擔(dān)負(fù)著重要的功能。Sox家族成員的典型特征是編碼的蛋白質(zhì)都具有一個(gè)保守的基序HMG-box，可以與DNA序列特異性結(jié)合，促進(jìn)基因的特異轉(zhuǎn)錄，從而在胚胎發(fā)育及性別分化中起著重要的調(diào)控作用。

2、>　　本文采用簡并PCR技術(shù)，對尼氏真綏螨Sox基因的保守序列和Dmrt基因的DM結(jié)構(gòu)域進(jìn)行了擴(kuò)增、克隆和測序，并將序列與GenBank中其他物種的相應(yīng)序列進(jìn)行同源性比較；用Swiss-model軟件模擬編碼氨基酸三維結(jié)構(gòu)，用MEGA4.0和ClustalW2等軟件構(gòu)建系統(tǒng)樹和分析了不同物種間Sox基因的保守序列和Dmrt基因的DM結(jié)構(gòu)域的進(jìn)化關(guān)系。
　　從尼氏真綏螨篩選克隆到4個(gè)Dmrt基因家族成員的DM結(jié)構(gòu)域，按通用命名法，根

3、據(jù)尼氏真綏螨的拉丁名Euseiusnicholsi，分別命名為EnDmrt2a，EnDmrt2b，EnDmrt2c，EnDmrt2d,它們與人DmrtA1、DmrtA2、DmrtA2、DmrtA1保守區(qū)的核苷酸的相似性分別為77％、76％、77％、72％，與人DmrtA2氨基酸序列的一致性分別為95％，95％，95％，91％；它們與人DmrtA2編碼的氨基酸三維模型間沒有明顯的變化；與人、獼猴、黃牛、鼠、褐牙鲆、太平洋牡蠣、大型蚤、果蠅

4、、線蟲等9個(gè)物種Dmrt基因DM結(jié)構(gòu)域編碼的氨基酸構(gòu)建的分子進(jìn)化樹表明，EnDmrt2a、EnDmrt2b、EnDmrt2和大型蚤聚為一類，與人等其他動(dòng)物的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，EnDmrt2d與所有動(dòng)物的親緣關(guān)系都遠(yuǎn)。
　　從尼氏植綏螨克隆得到了Sox基因HMG-box克隆，命名為EnSox1a。EnSox1a的核苷酸序列及其編碼氨基酸與其它無脊椎動(dòng)物和脊椎動(dòng)物物種的相似性分別達(dá)到74％-77％和85％-95％。與蜱、紅原雞、非洲爪蟾、

5、文昌魚、人、鼠、無腸蟲、野豬、貓等9種動(dòng)物Sox基因的HMG-box編碼氨基酸序列構(gòu)建的分子系統(tǒng)發(fā)育樹表明，EnSox1a單獨(dú)聚為一類，與其他物種的近緣關(guān)系較遠(yuǎn)。用EnSox1a、人Sox1和非洲爪蟾Sox2三者編碼氨基酸序列建立的三維結(jié)構(gòu)模型沒有幾乎沒有差異，說明不同物種Sox基因HMG-box具有功能上的相似性。
　　本研究結(jié)果顯示，在尼氏真綏螨基因組中存在著Sox和Dmrt基因家族的多個(gè)成員；與其他動(dòng)物Sox和Dmrt基因的