乙型肝炎病毒表面抗原磁微粒發(fā)光法定量檢測試劑盒的研發(fā).pdf

1、目的：建立各項(xiàng)性能指標(biāo)優(yōu)異的 HBsAg磁微粒發(fā)光法定量檢測試劑盒。為達(dá)成這一目標(biāo)，需要制備抗 HBsAg的單克隆抗體；試劑盒建立完成后，需要評估試劑盒各項(xiàng)性能指標(biāo)能否達(dá)到預(yù)期要求。
　　方法：1、制備乙肝表面抗原（HBsAg）單克隆抗體，通過有針對性的篩選，選擇反應(yīng)性強(qiáng)，靈敏度高和特異性好的單克隆抗體，初步建立試劑盒反應(yīng)體系，確定適合用于包被的單克隆抗體以及適合用于標(biāo)記的單克隆抗體。
　　2、單克隆抗體篩選完成后，針對包被

2、抗體，選擇合適效價(jià)，設(shè)計(jì)目標(biāo)是37℃放置14天后，仍能夠保持高度穩(wěn)定的磁微粒包被工藝，確定抗HBsAg抗體與磁微粒載體能夠穩(wěn)定連接，即使經(jīng)過長時(shí)間的高溫破壞性實(shí)驗(yàn)也能保持穩(wěn)定。
　　3、針對酶標(biāo)抗體，選擇合適效價(jià)，制備能夠滿足標(biāo)準(zhǔn)的酶結(jié)合物。建立37℃存放10天后仍能夠保持反應(yīng)性，保持穩(wěn)定的酶結(jié)合物稀釋液緩沖體系和保護(hù)蛋白種類。
　　4、對照國際或者國家標(biāo)準(zhǔn)，制備溯源校準(zhǔn)品，使樣本能夠定量計(jì)算且準(zhǔn)確。篩選建立經(jīng)過長時(shí)間的高溫

3、破壞性實(shí)驗(yàn)，也能保持穩(wěn)定校準(zhǔn)品緩沖體系。
　　5、通過大量實(shí)驗(yàn)研究，選擇合適的底物體系，本底低，信噪比小，起光迅速，發(fā)光持久，且穩(wěn)定性好的發(fā)光底物系統(tǒng)。
　　6、通過前期必要準(zhǔn)備和研究，建立HBsAg磁微粒檢測試劑盒。對試劑盒的靈敏度、特異性、精密性、準(zhǔn)確度、線性和穩(wěn)定性以及標(biāo)桿產(chǎn)品的臨床符合率等性能進(jìn)行考核。
　　結(jié)果：
　　一、建立起的HBsAg檢測試劑盒經(jīng)過各分析性能驗(yàn)證
　　1、分析靈敏度：不大于0

4、.02IU/mL。
　　2、功能靈敏度：為0.05IU/mL符合設(shè)計(jì)要求。
　　3、準(zhǔn)確性參考品：與國家準(zhǔn)確性參考品相比偏差不大于20％。
　　4、線性：在0.05-250IU/mL線性范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)大于0.9900；
　　5、準(zhǔn)確性：檢測國家準(zhǔn)確性參考品L1-L8偏差在20%以內(nèi)符合要求；
　　6、分析特異性：與 HCV抗體、HIV抗體、HAV-IgM抗體，抗核抗體陽性樣本，結(jié)果均小于0.05IU/mL

5、，表明均無交叉反應(yīng)。
　　7、精密度：三批產(chǎn)品測定結(jié)果分析內(nèi)變異、分析間變異、批間變異均小于20%，且并無顯著差異，在預(yù)期要求范圍內(nèi)。
　　8、干擾試驗(yàn)：測試樣本中加入5mg/mL血紅蛋白對樣本有一定的干擾作用，測試樣本中加入2.5mg/mL血紅蛋白對樣本無干擾作用，加入40mg/dl膽紅素、加入2000mg/dl甘油三酯對結(jié)果無影響。
　　9、抗凝劑及促凝劑的影響：促凝劑及肝素鈉、EDTA、枸櫞酸鈉等抗凝劑對檢測結(jié)果