褶紋冠蚌超氧化物歧化酶基因和溶菌酶基因的分子克隆及表達(dá)特征.pdf

1、褶紋冠蚌(Cristariaplicatal)是我國重要的“淡水育珠蚌”之一，開展其分子免疫的研究不僅具有理論意義，而且具有重要的應(yīng)用價值。本文對褶紋冠蚌超氧化物歧化酶(CpSOD)和溶菌酶(CpLYS)的cDNA進(jìn)行了克隆，并研究了這兩種酶的表達(dá)特征。 利用RACE-PCR及同源克隆方法，克隆出CpSODcDNA全長和CpLXS的部分cDNA。CpSOD基因全長891bp，其中編碼區(qū)468bp，5’端不翻譯區(qū)83bp，3’端不

2、翻譯區(qū)340bp(含ployA尾24bp)。該基因序列開放閱讀框編碼155個氨基酸，預(yù)測的分子量大小為15.8kDa，等電點為5.80。通過多序列比對結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CpSOD和許多動物的Cu/Zn-SOD相似，均含有保守的4個銅結(jié)合位點和4個鋅結(jié)合位點，信號肽預(yù)測未發(fā)現(xiàn)信號肽，表明CpSOD是胞質(zhì)Cu/Zn-SOD。BLAST分析顯示CpSOD與其它動物的Cu/Zn-SOD有很高的同源性，利用不同動物的胞質(zhì)Cu/Zn-SOD氨基酸序列構(gòu)建系

3、統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果表明褶紋冠蚌與太平洋牡蠣、櫛孔扇貝、紫貽貝共同形成一個小分支。CpLYS的部分cDNA包括530bp，3’端不翻譯區(qū)259bp(含ployA尾29bp)，共編碼89個氨基酸殘基。BLAST分析發(fā)現(xiàn)CpLYS的部分cDNA序列與其它動物的i-型溶菌酶有較高的同源性，所以推測CpLYS為i-型溶菌酶。 利用RT-PCR分析檢測CpSOD和CpLYS基因在注射嗜水氣單胞菌后的表達(dá)情況，結(jié)果表明經(jīng)注射嗜水氣單胞菌后，血細(xì)胞

4、中CpSOD基因的表達(dá)明顯增加，到12h后達(dá)到最大值，隨后表達(dá)下降，至48h后恢復(fù)至原有水平；而CpLYS基因在注射嗜水氣單胞菌后表達(dá)量一直增加，至48h后達(dá)到最大值，結(jié)果說明褶紋冠蚌在受到病原體侵害后，其體內(nèi)的超氧化物歧化酶和溶菌酶在免疫中均具有防御作用。 利用RT-PCR分析檢測CpSOD和CpLYS在各組織中的表達(dá)情況，結(jié)果表明，CpSOD基因在血液、外套膜、鰓、肝胰腺和閉殼肌中均有表達(dá)，CpLYS基因在血液、外套膜、鰓、