抗乙肝病毒新藥ZBH201001的一般毒性研究.pdf

1、目的:ZBH201001是軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所研究人員在阿米福韋化學結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上設(shè)計合成的一種核苷類抗乙肝病毒藥物。本研究依據(jù)藥物臨床前安全性評價相關(guān)指導原則，以Beagle犬為研究對象，分別進行單次給藥毒性研究和重復給藥毒性研究，觀察動物出現(xiàn)的毒性反應，了解ZBH201001的急性毒性作用，以及重復給藥毒性作用的靶器官及其損害的可逆性，確定未觀察到損害作用的劑量(NOAEL)，為其臨床試驗的用藥劑量和用藥安全劑量范圍提供參考，

2、同時為該新藥臨床申請和新藥注冊申請?zhí)峁?shù)據(jù)支持。
　　方法:(1) Beagle犬經(jīng)口急性毒性試驗:采用近似致死劑量法，單次經(jīng)口灌胃給藥，給藥劑量分別為118、264、594、890、1334、2000mg/kg體重。毒性檢測指標包括一般臨床觀察、體重、攝食量、體溫、心電圖、血液學、血液生化、凝血指標以及尿液化學，給藥觀察3周后，對所有動物進行組織病理學檢查。
　　(2) Beagle犬經(jīng)口重復給藥1個月毒性試驗:實驗設(shè)6.

3、0、12.0、24.0mg/kg體重組及玉米油溶劑對照組，每天經(jīng)口給藥1次，給藥期30天，給藥結(jié)束后恢復4周。連續(xù)給藥9天后，因各劑量組動物均出現(xiàn)了明顯的毒性反應，故將劑量調(diào)低為3.0、6.0與9.0 mg/kg體重，繼續(xù)給藥至實驗結(jié)束。實驗期間每日進行一般臨床觀察與體重、攝食量測定，給藥中期、給藥結(jié)束與恢復期分別進行體溫、心電圖、血液學、血液生化、凝血指標與尿液化學檢測，并于給藥結(jié)束與恢復期結(jié)束進行組織病理學檢查。
　　結(jié)果:(

4、1) Beagle犬經(jīng)口急性毒性試驗:Beagle犬單次經(jīng)口灌胃給藥，594mg/kg體重及以上劑量組動物給藥后籠旁觀察顯示，給藥后和/或藥后次日可見動物嘔吐，偶見稀便。隨后觀察到動物攝食狀況普遍較差、體重持續(xù)降低;約自第3周起，動物攝食狀況逐漸好轉(zhuǎn)，體重逐漸增加。890mg/kg體重劑量組1只雌性動物于給藥后第12天意外死亡，重復給予該劑量雄性動物存活。118mg/kg及264mg/kg組給藥后觀察到動物攝食減少，體重輕度降低。較高劑

5、量組動物給藥后個別時間點個別血液學指標、尿液化學指標出現(xiàn)異常變化，體溫、心電圖等參數(shù)未見有毒理學意義的改變。組織病理學檢查:890mg/kg組意外死亡動物尸檢除體型消瘦外未見明顯異常，鏡下檢查見肺嚴重水腫、出血、肺泡上皮脫落，胃腸系統(tǒng)出現(xiàn)病變;其余6只存活動物剖殺，體表和內(nèi)臟檢查均未見異常。1334mg/kg體重組動物肝臟灶性肝細胞空泡變性、散在壞死，結(jié)腸出血、上皮細胞壞死、炎性細胞浸潤;2000mg/kg體重組動物胃黏膜壞死、水腫;其

6、他動物各臟器未見明顯異常。
　　(2) Beagle犬經(jīng)口重復給藥1個月毒性試驗:結(jié)果顯示，以24.0、12.0、6.0 mg/kg體重劑量給藥9天后，雌、雄動物均表現(xiàn)出胃腸毒性反應，包括稀便、動物攝食狀況差、體重降低等體征，并呈現(xiàn)較明顯的量效與時效關(guān)系。因此將劑量將低為9.0、6.0與3.0 mg/kg體重繼續(xù)給藥，我們觀察到高劑量9.0 mg/kg體重組動物攝食量、體重持續(xù)降低，并陸續(xù)有稀便和/或血便等現(xiàn)象，并呈現(xiàn)消瘦、活動減

7、少等臨床體征;3.0、6.0mg/kg組動物體重雖仍低于同期對照組，但基本保持在穩(wěn)定的水平，未進一步降低。無論劑量調(diào)整前還是調(diào)整后，高、中、低劑量組動物的攝食量變化表現(xiàn)出與體重變化基本相一致的變化趨勢。各期高、中、低劑量組心電圖、體溫及眼科檢查均未見有毒理學意義的異常變化。給藥中期與給藥結(jié)束后血液學檢查提示高劑量組動物APTT明顯降低，并且這種變化在恢復期恢復正常，提示受試藥物可能會影響動物的內(nèi)源性凝血系統(tǒng)。各期尿液分析高、中、低劑量組

8、未見異常改變。組織病理學檢查，中劑量和/或高劑量組對消化管與胃腸系統(tǒng)具有明顯的毒性作用，中劑量和/或高劑量組動物胸腺、睪丸、前列腺、胰腺萎縮，骨髓紅系造血抑制、脂肪化，肝細胞腫脹、變性。上述各組織/臟器病變在恢復期均減輕和/或恢復，說明其毒性具有一定的可恢復性。給藥結(jié)束高、中、低劑量組均有部分動物出現(xiàn)肺水腫、肺泡上皮脫落、炎性細胞浸潤等病變，恢復期結(jié)束各組動物未見上述病變;考慮到口服給予供試品混懸液時動物偶有嗆咳反應，并且肺部病變的嚴重

9、程度及發(fā)生率無量效關(guān)系，因此認為所觀察到的肺部病變與給藥操作有關(guān)。
　　結(jié)論:在本試驗條件下，(1)Beagle犬經(jīng)口急性毒性試驗MTD＞2000mg/kg體重，最小毒性反應劑量為118mg/kg體重，胃腸道可能是ZBH201001對Beagle犬急性毒性作用的靶器官/靶組織。(2)Beagle犬經(jīng)口重復給藥1個月毒性試驗，中劑量和/或高劑量可引起食管、肝臟、胸腺、睪丸、前列腺、胰腺、骨髓、腎臟、胃腸系統(tǒng)一定的毒性反應，并可能影響