先天性特發(fā)性眼球震顫的致病基因篩查.pdf

1、目的：
　　對(duì)67個(gè)先天性特發(fā)眼球震顫家系（28例有家族史，39例散發(fā)）針對(duì)候選致病基因進(jìn)行基因篩查。
　　方法：
　　1.詳細(xì)詢問眼球震顫家系家族史及臨床表征，繪制家系圖，采集家系成員外周靜脈血5ml。2.采用傳統(tǒng)的苯酚-氯仿抽提法，提取基因組DNA，利用紫外分光光度儀，測(cè)出樣品的DNA濃度。3.對(duì)67個(gè)家系中的所有先證者DNA為模板，采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增2個(gè)候選基因FRMD7和GPR143的全部外顯子和外

2、顯子-內(nèi)含子的連接部分。4.PCR反應(yīng)的樣品純化后，采用直接測(cè)序法對(duì)擴(kuò)增片段進(jìn)行測(cè)序。5.對(duì)測(cè)序結(jié)果分析處理，若發(fā)現(xiàn)有基因突變，再對(duì)其家系其他家系成員進(jìn)行疾病的共分離分析，從而確定其為致病突變。6.對(duì)測(cè)序結(jié)果中有移碼突變的擴(kuò)增產(chǎn)物克隆至T5載體，以清晰確認(rèn)突變位點(diǎn)。
　　結(jié)果：
　　通過對(duì)FRMD7和GPR143的基因篩查，67例中，48例沒有發(fā)現(xiàn)突變，19例發(fā)現(xiàn)其中17例致病基因?yàn)镕RMD7，2例致病基因?yàn)镚PR143。1

3、7例FRMD7突變中，5例為剪接位點(diǎn)突變，3例為錯(cuò)義突變，2例為無(wú)義突變，7例為插入缺失移碼突變，2例GPR143突變分別為剪接位點(diǎn)突變c.886-2 A＞G和錯(cuò)義突變c.899 C＞T;p.P300L。
　　結(jié)論：
　　先天性特發(fā)眼球震顫有多種遺傳方式，包括常染色體顯性，常染色體隱性及X連鎖遺傳。雖然通過連鎖分析的方法已確定了7個(gè)基因位點(diǎn)，但是目前只有FRMD7和GPR143確定為先天性特發(fā)眼球震顫，本研究中發(fā)現(xiàn)的突變主要