藍(lán)隱藻藻藍(lán)蛋白性質(zhì)以及組成的研究.pdf

1、分類號：P735學(xué)號：201300370002碩士學(xué)位論文藍(lán)隱藻藻藍(lán)蛋白性質(zhì)以及組成的研究藍(lán)隱藻藻藍(lán)蛋白性質(zhì)以及組成的研究InvestigationofacteristicsCompositionofPhycocyaninfromChroomonasplacoidea研究生姓名研究生姓名：王寧：王寧指導(dǎo)教師：師：陳敏陳敏教授教授學(xué)科門類：理學(xué)理學(xué)專業(yè)名稱：海洋生物學(xué)海洋生物學(xué)論文提交日期論文提交日期：20201616年4月1日摘要摘要本

2、實驗以在本實驗室培養(yǎng)的藍(lán)隱藻（ChroomonasplacoideaT13）的藻藍(lán)蛋白PC645作為材料，探索了藻藍(lán)蛋白的存在狀態(tài)與鎂離子濃度的關(guān)系，并對在不同硫酸銨飽和度下所得的各級藻藍(lán)蛋白樣品的亞基組成、比例及疏水特性進(jìn)行了定量研究。采用蔗糖密度梯度離心方法，分離并觀察到了比異二聚體分子量更大的PC645復(fù)合物的存在，該復(fù)合物在以往的文獻(xiàn)中未曾報道。對純化后的藻藍(lán)蛋白聚合條件的研究結(jié)果表明，在加入的鎂離子濃度在0~50mmolL時，

3、藻藍(lán)蛋白基本集中于0.4molL~0.5molL蔗糖梯度范圍，以異二聚體形態(tài)為主；但在100mmolL以上時，隨著鎂離子濃度的提高，出現(xiàn)一定比例的解聚的藻藍(lán)蛋白單體形式，證實高濃度鎂離子不利于藻藍(lán)蛋白的聚合。利用變性IEF、SDSPAGE電泳技術(shù)對70%、80%、90%、100%的硫酸銨分級沉淀法所得各級藻藍(lán)蛋白純化樣品（A645A280＞7）的亞基進(jìn)行定性、定量分析。確定了純化后的藻藍(lán)蛋白至少含有四種發(fā)光亞基，即α1（9kDa，pI≈

4、9.1）、α2（8.3kDa，pI≈7.1）、β1（20.3kDa，pI≈6.0）、β2（16.7kDa，pI≈5.7）。且不同硫酸銨飽和度下所得的PC645沉淀樣品中β2亞基的相對含量與硫酸銨飽和度的增加（水溶性增加）呈負(fù)相關(guān)。說明藍(lán)隱藻中PC645的存在形式不是單一的，并且β2亞基所占比例的不同可能會導(dǎo)致其疏水性差異。對不同硫酸銨飽和度下所得的PC645沉淀樣品進(jìn)行疏水性分析的實驗結(jié)果表明，70%沉淀樣品可以產(chǎn)生3種疏水性不同的洗脫

5、峰（大峰、肩峰、小峰），說明沉淀物是由不同的疏水性混合組分構(gòu)成；而80%、90%、100%沉淀樣品的洗脫組分中疏水性最弱的大峰組分的相對含量有逐漸增加的趨勢，疏水性較強的肩峰和小峰組分的相對含量逐漸減少，甚至消失。分析顯示，三種疏水性不同的組分都是異二聚體PC645，且光譜特性沒有明顯區(qū)別。我們由上述結(jié)果推測，PC645在葉綠體中的存在狀態(tài)可能是不均一的；不同硫酸銨飽和度下得到的疏水程度不同的PC645樣品可能是由至少兩種以上的異二聚體