辣椒高賴氨酸基因(CFLR)導(dǎo)入小麥的研究.pdf

1、小麥?zhǔn)侵匾募Z食作物之一，利用基因工程進(jìn)行遺傳改良的研究一直倍受人們關(guān)注。小麥的遺傳轉(zhuǎn)化還處于不斷發(fā)展和完善階段。以Alondra為材料，用直徑0.6μm、1μm的金粉作為包裹介質(zhì)，以直徑小于0.5mm、1mm、大于1.5mm的幼胚作受體材料，1-7mg/L濃度的Basta篩選培養(yǎng)，以此建立起良好的再生休系和基因槍轉(zhuǎn)化體系。 賴氨酸為人體必須氨基酸，小麥中賴氨酸含量較匱乏，因此降低了小麥的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)。而其他禾谷類作物賴氨酸含量也較

2、低，通過(guò)遠(yuǎn)源雜交的方法獲得富含賴氨酸的小麥潛力不大，因此可通過(guò)基因工程的方法導(dǎo)入相關(guān)基因，如富含賴氨酸的蛋白基因，賴氨酸合成關(guān)鍵酶基因，賴氨酸分解酶基因干擾序列，以提高結(jié)合態(tài)或游離態(tài)賴氨酸含量。本研究把從辣椒中克隆了富含賴氨酸的蛋白基因cflr，(Genbank基因登錄號(hào)：EU367999)，以PAHC-25為基本載體，構(gòu)建PAHC-cflr載體，通過(guò)基因槍法將其轉(zhuǎn)入小麥。Cflr基因總氨基酸數(shù)223個(gè)，賴氨酸數(shù)40個(gè)，賴氨酸含量為21

3、.2％( w/w)，蘇氨酸數(shù)24個(gè)，蘇氨酸含量10.3％( w/w)。 主要的結(jié)果：在質(zhì)粒包裹過(guò)程中，采用直徑為0.6μm的金粉作為質(zhì)粒包裹的介質(zhì)時(shí)，不易結(jié)塊，分散較好，轉(zhuǎn)化效率較高，而直徑為1μm時(shí)，顆粒較大，容易沉淀，在載體膜上不易分散。用1mm左右的幼胚作為受體時(shí)，形成再生苗較好，較小或較大不易形成再生植株。用Basta篩選時(shí)，培養(yǎng)基中Basta含量3-4mg/L時(shí)篩選效果較好。通過(guò)Basta篩選，共獲得T0代篩選植株14